[发明专利]制备表鬼臼毒素双葡萄糖苷的方法及其专用菌株

说明书

技术领域

本发明涉及制备表鬼臼毒素双葡萄糖苷的方法及其专用菌株。

背景技术

鬼臼毒素(podophyllotoxin)主要存在于小檗科鬼臼属及其近缘植物中，是 一类具有广泛生物学活性的天然化合物，有拟雌激素样、抗雌激素样、抗癌、抗病 毒、抗真菌、镇静、抑制植物生长、抗氧化等作用。特别是其具有较强的抗癌活性， 其作用机制是抑制微管蛋白的解聚作用以阻止细胞分裂，及抑制DNA拓扑异构酶的 活性。其糖苷衍生物etoposide和teniposide毒性较低，对小细胞肺癌、淋巴癌 等多种肿瘤疾病均有很好的疗效，成为现在临床应用的广谱抗肿瘤药物。

目前鬼臼毒素主要是从野生鬼臼类植物的根茎中提取，而这类植物在全世界仅 有4属15种，我国有3属12种，主要生长在秦岭、西藏等高海拔地区。野生鬼臼 类植物生长缓慢，且其中鬼臼毒素类物质的含量较低。随着医学和农林防治方面对 鬼臼毒素类物质需求量日益增加，对野生鬼臼类植物原料的采集也加剧，已使其资 源遭到严重破坏；造成生物多样性和生态环境的不可逆的损失，因此解决鬼臼毒素 类物质的来源问题具有重要意义。

野生鬼臼类植物生长环境复杂、难以模拟，生长周期长，所以很难进行大规模 的人工栽培，而组织培养技术对于鬼臼类植物也不适用；鬼臼毒素类物质化学结构 复杂，化学合成虽可进行，但成本太高；基因工程学手段构建工程菌也由于参与形 成该类物质的酶数量过多而无法进行。所以需要寻找有效可行的制备鬼臼毒素类物 质的方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种可产表鬼臼毒素双葡萄糖苷的菌株及其培养方法。

本发明所提供的菌株为寄生曲霉(Aspergillus parasiticus)TEQB。该菌株 已于2009年6月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简 称CGMCC，地址：北京市朝阳区大屯路，中国科学院微生物研究所，邮编100101)， 保藏号为CGMCC No.3116。

本发明所提供的培养寄生曲霉(Aspergillus parasiticus)TEQB CGMCC No.3116 的方法，是用马铃薯葡萄糖培养基培养寄生曲霉(Aspergillus parasiticus)TEQB CGMCC No.3116。

所述培养方法中，所述培养的条件可包括温度为26-30℃、振荡速度为 100-150rpm。所述温度具体可为28℃；所述振荡速度具体可为120rpm。

本发明的另一个目的是提供一种制备表鬼臼毒素双葡萄糖苷的方法。

本发明所提供的制备表鬼臼毒素双葡萄糖苷的方法，包括如下步骤：发酵培养 寄生曲霉(Aspergillus parasiticus)TEQB CGMCC No.3116，得到表鬼臼毒素双 葡萄糖苷。

所述发酵培养中用到的培养基可以是马铃薯葡萄糖培养基。

所述发酵培养的条件包括温度为26-30℃、振荡速度为100-150rpm。所述发酵 培养的时间可为5-9天。所述温度具体可为28℃；所述振荡速度具体可为120rpm； 所述时间具体可为7天。

所述制备方法中在所述发酵后，还可包括萃取的步骤。

所述萃取溶剂为氯仿。

所述萃取具体可以是对所述发酵得到的发酵产物滤去菌丝体后的发酵液进行 萃取。

寄生曲霉(Aspergillus parasiticus)TEQB CGMCC No.3116在制备表鬼臼毒 素双葡萄糖苷中的应用也属于本发明的保护范围。

本发明的菌株可以用于制备表鬼臼毒素双葡萄糖苷。本发明的制备表鬼臼毒素 双葡萄糖苷的方法具有操作简单、成本低廉、易操作、生产周期短的优点。本发明 方法为制备表鬼臼毒素双葡萄糖苷提供了新途径，避免了现有技术中其它各种制备 方法的局限性，具有很强的可操作性，适合于工业化大规模生产，同时又对保护植 物生态多样性具有重要意义。

附图说明

图1为寄生曲霉的菌落。

图2为寄生曲霉孢子头和孢子形态。A(10×40)和B(10×100)为孢子头形 态，C(10×100)为孢子形态。

图3为表鬼臼毒素双葡萄糖苷标准品HPLC谱图。

图4为寄生曲霉发酵液氯仿提取物的HPLC谱图。

具体实施方式