[发明专利]构建膀胱出口梗阻动物模型的方法

说明书

技术领域

本发明涉及构建膀胱出口梗阻动物模型的方法。

背景技术

膀胱出口梗阻(BOO)是下尿道综合症(LUTS)的主要病因之一，在成年男性中发病率很高，且随着年龄增长而增加。我国男性LUTS患病率不断上升，几乎接近欧美国家，严重影响着男性的生理健康和生活质量。膀胱出口梗阻动物模型的产生对于病理的分子机制研究以及药物的筛选具有重要的意义。目前主要有如下两种方法产生的梗阻动物模型：①手术结扎法：对鼠、兔等小型动物尿道进行结扎形成机械性梗阻。其梗阻程度难以确定；一旦结扎梗阻即可形成，是一种急性梗阻，而非人类的慢性进行性梗阻；②NO合酶(iNOS)缺陷的基因敲除小鼠：这是迄今为止所报道的唯一一个BOO基因修饰的动物模型，但是其BOO的发病率只有20％。

现有的梗阻动物模型存在着发病率低、不能确切地模拟病因等问题，因而不能成为基础研究和应用上通用的模型。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种构建膀胱出口梗阻动物模型的方法。

本发明所提供的构建膀胱出口梗阻动物模型的方法，是向动物中转入芳香化酶编码基因，得到含有所述芳香化酶编码基因的动物作为膀胱出口梗阻动物模型。

其中，所述向动物中转入芳香化酶编码基因的方法可包括如下步骤：向离体的所述动物的受精卵中导入所述芳香化酶编码基因，得到含有所述芳香化酶编码基因的受精卵，再将其通过非外科手术方法移入另一所述动物的子宫中，产出含有所述芳香化酶编码基因的动物幼仔，即为所述膀胱出口梗阻动物模型。

所述芳香化酶编码基因具体可以是通过表达盒转入的。所述表达盒具体可以是由启动子序列、芳香化酶编码基因序列和牛生长激素基因的polyA信号序列按上游至下游的次序依次连接形成的。

所述表达盒具体可是通过重组载体导入的。

所述芳香化酶编码基因为人芳香化酶编码基因。

所述人芳香化酶编码基因可为如下的a)、b)或c)所示的分子：

a)序列表中序列2自5′末端起第7-2154位核苷酸所示的DNA分子；

b)在严格条件下与a)限定的DNA序列杂交且编码人芳香化酶的DNA分子；

c)与a)限定的DNA序列具有90％以上的同源性且编码人芳香化酶的DNA分子。

所述启动子可为如下的1)、2)或3)所示的分子：

1)序列表中序列1自5′末端起第7-1217位核苷酸所示的DNA分子；

2)在严格条件下与1)限定的DNA序列杂交且具有相同功能的DNA分子；

3)与1)限定的DNA序列具有90％以上的同源性且具有相同功能的DNA分子。

所述牛生长激素polyA信号的核苷酸序列具体可如序列表中序列3所示。

所述动物具体可为鼠，优选为C57BL/6小鼠。

人芳香化酶编码基因在构建膀胱出口梗阻动物模型中的应用也属于本发明的保护范围。

老年男性体内的激素水平呈现雌/雄激素比例上升的状态，而膀胱出口梗阻主要发生于老年男性。该动物模型由于高表达了芳香化酶(体内将雄激素转化为雌激素的关键酶)，体内的雌激素水平高，近似地模拟了老年男性体内的激素状态。这种激素状态潜移默化地诱导很多相关疾病，包括膀胱出口梗阻，它区别于其它几种手术急性梗阻模型，是由于激素水平的变化而导致的慢性疾病，比较符合临床上老年男性多发膀胱出口梗阻疾病的表现。

本发明的发明人对多种动物进行了大量的实验，最后发现用C57BL/6小鼠作为受体动物，构建的模型比其它品种的小鼠效果要好，其它品种小鼠构建的模型的膀胱出口梗阻的表型没有C57BL/6明显。

本发明模拟老年男性体内雌/雄激素比例升高的特点，利用转基因的方法使小鼠体内高表达雌激素，实现自发的产生膀胱出口梗阻。与现有的结扎法所产生的急性梗阻相比，本发明的动物模型产生的梗阻类似于人类的慢性进行性梗阻，能够确切的模拟病因，更加符合人类实际发病情况；与NO合酶(iNOS)缺陷的基因敲除小鼠模型相比，本发明模型的发病率更高，可达90％(N＝20)。与相同条件下用FVB/N鼠构建的模型相比，本发明构建的模型的性状明显，发病率高，FVB/N鼠构建的模型的发病率仅为5％。本发明模型可应用于雌激素诱导膀胱逼尿肌功能异常的分子机理的研究、在体动物水平抑制雌激素信号通路对膀胱逼尿肌的功能的改变的研究等，因此，本发明的动物模型更加适合于对膀胱出口梗阻的病理分子机制的研究以及药物的筛选，具有重要意义。

附图说明

图1为芳香酶表达载体的结构示意图。

图2为PCR鉴定结果图。