[发明专利]一种抑制桃褐腐病菌的缓释微囊及复合膜的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于杀菌剂生产领域，涉及一种中药提取物小檗碱(又名黄连素) 对桃褐腐病菌(Monilinia fructicota)的缓释微囊及复合膜的制备方法。

背景技术

从药用植物中筛选抗真菌活性物质是当前杀菌剂研发的重要方向。我国 拥有丰富的药用植物资源，借鉴中医药研究成果，可望从药用植物中筛选出 抗植物病原真菌的天然活性物质。这些活性物质可直接作为天然杀菌剂，或 以此为先导化合物，通过结构修饰而开发为高活性杀菌剂。

桃褐腐病是一种真菌病害，为害桃树的花叶、枝梢及果实，尤以果实受 害最重，引起大量落果和烂果，造成巨大的经济损失。传统化学农药因污染 环境以及病菌耐药性而逐渐被禁用。目前国内外尚无高效防治桃褐腐病且对 环境友好的天然农药。此外，传统剂型因短暂药效不能满足现代农药的要求， 所以亟待筛选高效抑制桃褐腐病菌且对环境友好的天然活性物质，并开发为 新剂型以延长药效时间。

经过大量筛选，发现中药黄连提取物中的小檗碱对桃褐腐病菌具有强烈 抑制作用。在此基础上，以壳聚糖为囊壁材料，以小檗碱为囊心，制备了小 檗碱-壳聚糖微囊，体外释放试验表明其缓释效果。此外，以小檗碱、壳聚糖 为主料制备了复合膜，该膜因具有缓释效果而持久抑制桃褐腐病菌，并且该 膜还具有保鲜效果。

发明内容

鉴于现有化学农药对环境污染和人的毒性以及短暂药效，本发明旨在克 服这些缺陷，寻求一种可以有效抑制桃褐腐病菌的天然药物，并将其制成缓 释剂型。涉及长效杀菌的小檗碱-壳聚糖微囊以及具有抗菌和保鲜双重功能的 复合膜。

本发明提供了一种抑制桃褐腐病菌的微囊的制备方法，其特征在于，该 方法包括如下步骤：

1)称取壳聚糖和小檗碱，壳聚糖和小檗碱的质量比为9-11∶0.22-0.28， 加入醋酸溶液，待壳聚糖和小檗碱充分溶胀后，搅拌溶解，静置，去气泡， 得到小檗碱-壳聚糖溶液，备用；

2)将小檗碱壳聚糖溶液逐滴加入含司盘80的大豆油中，在40～50℃恒 温下，进行搅拌，乳化28-32min后形成W/O体系；

3)逐滴加入戊二醛溶液，搅拌2.5-3.5个小时，离心，使微囊完全沉降；

4)倾取上层制备液，所得微囊用石油醚洗涤3-5次，所得微囊在48-52℃ 下真空干燥23-25小时，即得。

本发明还提供了一种抑制桃褐腐病菌的缓释复合膜的制备方法，其特征 在于，该方法包括如下步骤：

1)称取壳聚糖，加入到含2％醋酸和5-10％甘油的水溶液中，同时加 入小檗碱，温度低于40℃，搅拌，使小檗碱及壳聚糖完全溶解配置成膜液， 壳聚糖和小檗碱的质量比为9-11∶0.22-0.28。

2)静置，使膜液中的气泡完全消失，将膜液倾倒于平板上，自然风干 后揭膜。

通过大量筛选，发现黄连这一传统中药的提取物对桃褐腐病菌具有强烈 抑制效果。进一步分析发现，黄连提取物中的小檗碱发挥着关键作用，小檗 碱即能强烈抑制菌丝生长和孢子萌发。为避免传统农药的短暂药效，制备了 具有缓释效果的微囊和复合膜，两者均具缓释效果。此外，小檗碱-壳聚糖复 合膜对桃具有保鲜功能。由于小檗碱为天然化合物，对环境和植物无毒副作 用，且已能人工合成，适合工业放大，所以具有广阔市场前景。

具体实施方式

下面的具体方法可以使本领域技术人员更全面地理解本发明，但不以任 何方式限制本发明。

小檗碱在0.001～100mg/mL范围内，随着浓度的升高，其抑制作用逐渐 增强，小檗碱对桃褐腐病菌的有效中浓度EC₅₀为4.55ug/mL，即导致50％菌体 死亡的浓度。

小檗碱水溶液按7.5mg/mL，3.75mg/mL，1.875mg/mL，0.937mg/mL， 0.468mg/mL，0.234mg/mL，0.117mg/mL，0.058mg/mL浓度配制，各取6mL 分别加入54mL融化的培养基(约60℃)，搅拌混匀，116℃高压灭菌25min测得 小檗碱的最小抑菌浓度(MIC)为46.9ug/mL，即在此浓度下菌丝完全停止生 长。

抑制桃褐腐病菌的缓释微囊的制备：

1)称取壳聚糖和小檗碱，壳聚糖和小檗碱的质量比为9-11∶0.22-0.28， 加入醋酸溶液，待壳聚糖和小檗碱充分溶胀后，搅拌溶解，静置，去气泡， 得到小檗碱-壳聚糖溶液，备用；