[发明专利]一种检测甲型H1N1流感病毒的试剂盒及专用引物和靶序列

权利要求书

1.一种检测甲型H1N1流感病毒的专用引物，由4条特异性引物组成，其特征在于，所述4条特异性引物的序列分别为：引物F1核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.2所示，引物B1核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.3所示，引物F2核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.4所示，引物B2核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.5所示。

2.一种检测甲型H1N1流感病毒的试剂盒，其特征在于，包括含有权利要求1所述专用引物的反应预混液。

3.根据权利要求2所述的检测甲型H1N1流感病毒的试剂盒，其特征在于，所述反应预混液为下述成分的混合液且各成分的终浓度为：引物F1 1.76μM；引物B 1 1.76μM；引物F2 0.29μM；引物B2 0.29μM；dNTP 2.05mM；1.47×Bst DNA聚合酶缓冲液；MgSO₄11.76mM；甜菜碱1.47M。

4.根据权利要求3所述的检测甲型H1N1流感病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括Bst DNA聚合酶、RNA酶抑制剂、AMV反转录酶和无RNA酶的ddH₂O。

5.根据权利要求4所述的检测甲型H1N1流感病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括SYBR Green I。

6.根据权利要求5所述的检测甲型H1N1流感病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阳性模板和阴性模板。

7.一种非诊断目的的检测甲型H1N1流感病毒的方法，其特征在于，以被检测样品的总RNA为模板，利用权利要求2-6任一项所述的检测甲型H1N1流感病毒的试剂盒进行环介导反转录等温扩增反应，然后鉴定被检测样品是否为甲型H1N1流感病毒阳性。 

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述环介导反转录等温扩增反应的程序为62℃反应60min；然后80℃加热2min终止反应。

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述鉴定被检测样品是否为甲型H1N1流感病毒阳性的方法为下述方法中的一种或多种：

(1)利用反应沉淀浊度来判定，见白色沉淀为阳性；

(2)反应产物中加入荧光染料SYBR Green I来判定，呈绿色为阳性；

(3)通过电泳分析判定，见梯状条带为阳性。