[发明专利]一种定量检测血液中癌胚抗原的磁性免疫层析试纸条及制备方法

权利要求书

1.一种定量检测血液中癌胚抗原的磁性免疫层析试纸条，其特征在于：该试纸条是在底板上依次相互交错2mm地粘贴包被膜、结合了CEA抗体的磁颗粒垫、样品垫、吸水垫、然后在上层覆盖透明塑料密封膜而组装成的试纸条，包被膜上预包被有CEA抗体的检测线T和质控线C。

2.根据权利要求1的定量检测血液中癌胚抗原的试纸条制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

抗体的制备：选用单克隆抗体技术制备的高效价CEA配对抗体，使用亲和层析技术纯化；

磁颗粒的制备：1)链亲和素化磁颗粒的制备：使用含有0.1％Tween-20的50mmol，pH4.5-5.0的醋酸钠缓冲液洗涤磁颗粒，加入碳二亚胺和琥珀酰亚胺使二者终浓度均为20mmol，室温反应1小时，充分洗涤磁颗粒后加入链亲和素使链亲和素与磁颗粒的分子比为5∶1(摩尔比)，室温反应3小时，加入含有0.5％BSA的0.02M，pH7.0-7.6的PBS室温封闭30分钟，洗涤磁颗粒，使用含有1％PVP，1％Casein，0.5％Tween-20，5％蔗糖的50mmol，pH8.2-9.0的硼酸保存缓冲液，复溶磁颗粒，4℃保存备用；2)生物素化CEA抗体的制备：将CEA抗体对0.02M pH7.0-7.6的PBS 4℃透析过夜，调整浓度为2mg/ml，将预活化生物素使用二甲基亚砜溶解，终浓度为50mmol，以25∶1的分子比例向抗体溶液中加入所需量的生物素溶液，室温反应1小时，对0.02M，pH7.0-7.6的PBS 4℃透析过夜，加入等体积甘油后-20℃保存备用；3)生物素化抗体与链亲和素化磁颗粒的混合，以0.8μl/mg磁颗粒的量向链亲和素化磁颗粒溶液中加入生物素化CEA抗体，充分混匀后使用保存缓冲液以1∶5-1∶20的比例(体积比)将混合物稀释待喷涂玻璃纤维垫使用；

包被膜的制备：使用0.02mM，pH7.0-7.6的PBS，分别将抗CEA包被抗体以及生物素化牛血清白蛋白分别稀释到0.5mg/ml和2mg/ml的浓度，使用定量喷膜装置以1μl/cm的量将二者以0.8cm的间隔喷印于硝酸纤维素膜上，室温晾干30分钟后于封闭液中浸泡10分钟后于25-35℃烘干8小时，加入干燥剂封存备用；

样品垫的处理：将样品垫放入样品垫处理溶液中浸泡处理1小时后取出25-35℃烘干8小时；

试纸条的组装：在透明塑料底板上依次相互交错2mm贴上包被膜，磁颗粒垫，样品垫，吸水垫，然后在上层覆盖透明塑料密封膜得到试纸板，根据要求宽度切割即得到试纸条。