[发明专利]禽Ⅰ型马立克病毒疫苗株基因工程通用载体的构建方法及其应用

权利要求书

1.一种高效的禽I型马立克病毒疫苗株基因工程通用载体T-Us，其特征在于该通用载体含有：

1)如序列1所示的核苷酸序列的报告和筛选基因S-g-n；

2)如序列6所示的核苷酸序列的同源臂U；

3)如序列9所示的核苷酸序列的表达盒基因C-M-A。

2.一种高效的禽I型马立克病毒疫苗株基因工程通用载体T-Us的构建方法，其特征在于构建方法包括以下步骤：

1)由设计合成的序列2，3和序列4，5所示的两对引物经扩增后获得具有序列1所示的报告和筛选基因核苷酸序列；

2)由设计合成的序列7，8所示的一对引物经扩增后获得具有序列6所示的同源臂基因U的核苷酸序列，连入pMD18-T质粒中，构建通用载体同源臂质粒T-U；

3)由设计合成的序列10，11所示的一对引物经扩增后获得具有序列9所示的表达盒核苷酸序列；

4)将以上元件的核苷酸序列在体外连接后，转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞，构建成通用载体T-Us。

3.一种高效的禽I型马立克病毒疫苗株基因工程通用载体T-Us的应用，其特征在于是将通用载体T-Us与禽I型马立克病病毒共转染，获得重组MDV CVI988-26株，2009年06月18日已将本病毒株送交中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为：CGMCC No.3132。

4.如权利要求3所述的一种高效的禽I型马立克病毒疫苗株基因工程通用载体T-Us的应用，其特征在于提供了一种重组禽I型马立克病毒的筛选方法是：用含0.4mg/ml G418培养液加压24h的CEF细胞，接种重组病毒，37℃继续培养，每24h更换50％的培养液维持G418筛选压力不变，于第5天将感染的细胞消化下来，再接种于新鲜的细胞上，如此重复4次，筛选到重组病毒，同时，结合荧光观察重组病毒的含量和纯度。

5.如权利要求3所述的一种高效的禽I型马立克病毒疫苗株基因工程通用载体T-Us的应用，其特征在于所得到的重组禽I型马立克病病毒CGMCC No.3132病毒携带有禽I型马立克病毒疫苗株基因工程通用载体T-Us，用该病毒免疫动物可不受母源抗体影响，刺激机体产生对多种病毒的抗体，且能有效保护禽类免遭禽马立克病毒的攻击。