[发明专利]辅助鉴定大豆籽粒含油量位点的一对专用引物及其方法

说明书

技术领域

本发明涉及用于辅助鉴定大豆籽粒含油量位点的一对专用引物及其方法。

背景技术

基于表型选择的常规育种方法存在选择效率低和育种周期长等缺点，迫切需要 注入现代分子技术手段，辅之于高效率地基因型定向选择，才能快速高效地培育出 优异大豆新品种。随着分子生物学和基因组学的迅速发展，分子标记技术的应用更 加广泛。基于PCR的分子标记如SSR等具有多态率高、相对稳定、检测方法简便快 速及易于操作等特点而深受育种家的青睐。由于分子标记辅助选择不易受环境因素 影响和性状显隐性干扰等，可以从分子水平定向选择目标性状基因(或称胶上选 择)，同时还有可能打破不利基因之间的连锁而高效率地聚合多个优良基因于一体。 通常所说的分子标记既包括目标基因的连锁标记也包括目标基因自身功能标记。分 子标记辅助多基因聚合育种技术已经成为大豆等作物育种研究的一种发展趋势，运 用该技术能否有效地将优质、多抗和高产等基因聚合到少数骨干品种中，关键在于 能否获得足够多的与目标性状基因或主效QTL紧密连锁的实用分子标记。近年来， 基于基因组中表达序列标签(expressed sequence tagging，EST)的SSR标记 EST-SSR已经发展为新一代的分子标记，得到了广泛的研究和应用，因它是新型的 功能标记而且能更有效地用于农作物重要性状基因的辅助选择育种而倍受重视。

大豆种子油脂含量属于数量遗传性状，受不等效的多基因控制，存在主效位点， 其中有些位点受加性效应控制，并存在一定的显性效应和上位效应。该性状的遗传 力中等偏上，高于单株籽粒产量而低于开花期和成熟期等性状，可从F₂、F₃代开始 进行选择。国内外许多研究者对大豆种子油脂含量和脂肪酸含量的QTL进行了分子 标记和定位研究，取得了不少进展。Mansur等发现1个与大豆种子油脂含量有关的 标记T153-1位于A2连锁群；Brummer等研究发现位于B1连锁群的1个油脂含量主效位 点(可解释31％变异)及其1个相关标记A109、位于A1连锁群的1个油脂位点及其相 关标记A104以及位于G连锁群的1个油脂位点(可解释18％以上的变异)及其相关标 记A584。南京农业大学与中科院遗传发育所合作研究发现了4个QTL位点与油脂含量 紧密相关，解释的表型效应最高达到13.9％，并把这些位点定位于N4-B2和N20-M连锁 群。何冉等利用科新3号为父本、中黄20为母本建立重组自交系群体(含有192个株 系)，在0连锁群的Satt153-Satt243区间定位了1个脂肪含量QTL，加性效应为-0.39， 表明其减效效应来自于中黄20。

发明内容

本发明的目的是提供用于辅助鉴定大豆籽粒含油量位点的一对专用引物及其 方法。

本发明提供了一种辅助筛选具有高籽粒含油量性状的大豆的方法，包括如下步 骤：

以待测大豆的基因组DNA为模板，用GNE165引物对进行PCR扩增，检测扩增 产物，扩增产物中含有一个275-285bp之间的DNA片段的待测大豆为候选的具有高 籽粒含油量性状的大豆；所述GNE165引物对由序列表的序列1和序列表的序列2 所示核苷酸组成；所述高籽粒含油量性状为籽粒的含油量≥21.5％(质量百分含量) 的性状。

本发明还提供了一种辅助鉴定大豆高籽粒含油量性状的方法，包括如下步骤：

以待测大豆的基因组DNA为模板，用GNE165引物对进行PCR扩增，检测扩增 产物，扩增产物中含有一个275-285bp之间的DNA片段的待测大豆具有高籽粒含油 量性状；所述GNE165引物对由序列表的序列1和序列表的序列2所示核苷酸组成； 所述高籽粒含油量性状为籽粒的含油量≥21.5％(质量百分含量)的性状。

本发明还保护一对辅助鉴定大豆籽粒含油量性状的专用引物，是GNE165引物 对；所述GNE165引物对由序列表的序列1和序列表的序列2所示核苷酸组成。从 实际应用角度出发，上述专用引物主要用于辅助鉴定大豆高籽粒含油量性状；所述 高籽粒含油量性状为籽粒的含油量≥21.5％(质量百分含量)的性状。

所述专用引物在制备辅助鉴定大豆籽粒含油量性状的试剂盒中应用也属于本 发明的保护范围。从实际应用角度出发，上述专用引物主要用于制备辅助鉴定大豆 高籽粒含油量性状的试剂盒；所述高籽粒含油量性状为籽粒的含油量≥21.5％(质 量百分含量)的性状。