[发明专利]注射式血管化脂肪组织及其构建方法

权利要求书

1.一种构建血管的方法，包括以下步骤：

1)将自体干细胞分别诱导为平滑肌细胞和内皮细胞，平滑肌细胞与涂覆材料均匀混合，然后加入组织细胞微球，使其在培养空间能形成至少两层，进行培养，直至含有平滑肌细胞的涂覆材料均匀分布在组织细胞微球表面并通过自组装作用将微球连接成整体，微球之间的间隙形成通道；

2)在通道内表面复合内皮细胞。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤2)之后，还包括3)将血管化生长因子包裹在海藻酸钠基水凝胶材料中，制成细胞因子缓释微球，然后与步骤2)获得的组织均匀混合。

3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤1)所述组织细胞微球和步骤3)所述细胞因子缓释微球都采用非接触式高压静电法制备。

4.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述组织细胞微球的粒径为100μm～500μm；所述细胞因子缓释微球的粒径为20μm～50μm。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述涂覆材料为细胞亲和力高、有自组装作用的生物材料；优选选自胶原、纤维蛋白原、matrigel的一种或多种。

6.如权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于，所述步骤2)如下进行：将内皮细胞悬液作为培养液，将步骤1)制备的组织利用脉动培养或普通培养方式进行培养，使内皮细胞附着在所述通道的内壁，形成外壁为平滑肌细胞、内壁为内皮细胞的血管组织。

7.一种基于自体干细胞的注射式血管化脂肪组织，由以下步骤制备：

1)脂肪细胞微球的构建：取脂肪干细胞，包裹于海藻酸钠基水凝胶材料内形成脂肪干细胞微球，然后用成脂诱导培养液培养，使脂肪干细胞分化为脂肪细胞，得到脂肪细胞微球；

2)以权利要求1或4所述的方法构建血管，其中组织细胞为脂肪干细胞，包括：i)将脂肪干细胞分别诱导成平滑肌细胞和内皮细胞；ii)将平滑肌细胞与涂覆材料均匀混合；iii)加入脂肪细胞微球，与包含平滑肌细胞的涂覆材料均匀混合，使脂肪细胞微球在培养空间能形成至少两层，进行培养，直至含有平滑肌细胞的涂覆材料均匀分布在脂肪细胞微球表面并通过自组装作用将脂肪细胞微球连接成整体，微球之间的间隙形成作为构建微血管的空间的通道；iv)在通道内表面复合内皮细胞，形成血管/脂肪细胞体系；

3)细胞因子缓释微球的构建：将血管化细胞因子包裹于海藻酸钠基水凝胶材料内，制成细胞因子缓释微球；

4)注射式血管化脂肪组织的构建：将步骤3)制得的细胞因子缓释微球与步骤2)得到的血管/脂肪细胞体系混合，直接得到注射式血管化脂肪组织或先经过培养，得到注射式血管化脂肪组织。

8.如权利要求7所述的脂肪组织，其特征在于，所述脂肪干细胞是自体脂肪干细胞；所述自体脂肪干细胞采用抽脂手术得到的自体脂肪组织来提取，并通过体外平面培养扩增至足够数量得到。

9.如权利要求7或8所述的脂肪组织，其特征在于，所述海藻酸钠基水凝胶材料是海藻酸钠、海藻酸钠/胶原、海藻酸钠/明胶、海藻酸钠/纤维蛋白元中的一种或多种；所述血管化细胞因子为促进毛细血管发生和促进血管成熟的细胞因子，包括血管内皮细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、血小板衍生生长因子、转化生长因子和血管生成素-1及血管相关生长因子。

10.如权利要求7-9任一所述的脂肪组织的构建方法，包括以下步骤制备：

1)脂肪细胞微球的构建：取脂肪干细胞，包裹于海藻酸钠基水凝胶材料内形成脂肪干细胞微球，然后用成脂诱导培养液培养，使脂肪干细胞分化为脂肪细胞，得到脂肪细胞微球；

2)以权利要求1或4所述的方法构建血管，其中组织细胞为脂肪干细胞，包括：i)将脂肪干细胞分别诱导成平滑肌细胞和内皮细胞；ii)将平滑肌细胞与涂覆材料均匀混合；iii)加入脂肪细胞微球，与包含平滑肌细胞的涂覆材料均匀混合，使脂肪细胞微球在培养空间能形成至少两层，进行培养，直至含有平滑肌细胞的涂覆材料均匀分布在脂肪细胞微球表面并通过自组装作用将脂肪细胞微球连接成整体，微球之间的间隙形成作为构建微血管的空间的通道；iv)在通道内表面复合内皮细胞，形成血管/脂肪细胞体系；

3)细胞因子缓释微球的构建：将血管化细胞因子包裹于海藻酸钠基水凝胶材料内，制成细胞因子缓释微球；

4)注射式血管化脂肪组织的构建：将步骤3)制得的细胞因子缓释微球与步骤2)得到的血管/脂肪细胞体系混合，直接得到注射式血管化脂肪组织或先经过培养，得到注射式血管化脂肪组织。