[发明专利]游离甲状腺素的磁微粒化学发光免疫分析试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于免疫分析医学领域，具体的说涉及一种游离甲状腺素的磁微粒化学发光免疫分析试剂盒及其制备方法。该试剂盒结合了免疫磁微粒分离技术和化学发光免疫分析技术，检测范围宽，灵敏度高。

背景技术

甲状腺是人体内最大的内分泌腺，成人平均生理重量约为20-25g。甲状腺内含有许多大小不等的圆形或椭圆形腺泡。腺泡是由单层的上皮细胞围成，腺泡腔内充满胶质。胶质是腺泡上皮细胞的分泌物，主要成分为甲状腺球蛋白。腺泡上皮细胞是甲状腺激素的合成与释放的部位，而腺泡腔的胶质是激素的贮存库。甲状腺激素影响所有组织的成熟、生长、代谢活动和功能，是很重要的激素。

甲状腺素，又称四碘甲腺原氨酸(thyroxine，3，5，3’，5’-tetraiodotyyronine，T₄)，分子量大小为776.93。甲状腺素经甲状腺分泌释放进人血液循环后，立即与血浆中甲状腺素结合球蛋白结合，处于结合态的激素失去活性，仅少量处于游离状态而发挥生理作用。在正常的生理状况下，血液循环中的T₄有99.97％与蛋白结合；游离甲状腺素(free thyroxine，FT₄)只占0.03％。在结合型的T₄中，有60％与甲状腺素结合球蛋白(thyroxine binding globulin，TBG)结合，30％与甲状腺结合清前白蛋白(thyroid binding preallbumin，TBPA)结合，另有9.97％与清蛋白(albumin，Alb)结合。血清游离甲状腺素FT₄的生理浓度，不受机体甲状腺结合球蛋白浓度的影响，无论是生理性的的增加，还是病理性的减少，对FT₄的生理浓度均无影响。FT₄可作为下丘脑-垂体-甲状腺轴疾病可疑患者的筛选指标之一，测定血清FT₄对诊断甲状腺功能性疾病，具有重要的临床价值。

免疫学测定是以抗体-抗原的特异性识别、抗体标记技术和示踪技术为基础的定量技术，在肿瘤标志物的体液检测中具有广泛应用。现有的甲状腺激素的测定方法有平衡透析法、放射免疫分析法、酶联免疫吸附分析法、时间分辨荧光免疫分析法、电化学发光检测法及微孔板酶促化学发光免疫分析法等。但这些方法都具有一定局限性，如，平衡透析法操作步骤繁琐，操作时间长；放射免疫分析方法的试剂具有放射性，会对操作人员的身体健康产生影响，操作不能实现自动化；酶联免疫分析方法灵敏度低，步骤繁琐；时间分辨荧光免疫分析法与电化学发光检测法都需要较为昂贵的稀土元素作为试剂，不利于大范围的推广使用；微孔板酶促化学发光免疫分析法则受到固相载体表面积的限制，无法实现较宽范围的检测。

在实际的免疫检测中，由于待测样品中所含的杂质成分较多，一定程度上影响了检测灵敏度和准确性，所以从复杂的样品基质中快速分离、纯化出目的待测物，是临床检验工作者面临的难题之一。免疫磁微粒技术是利用高分子材料合成一定粒度大小的磁性固相微粒作载体，以物理吸附、化学偶联等方法包被上具有特异性亲合力的各种免疫活性物质(抗原或抗体)，使其致敏为免疫磁微粒，具有分离速度快、效率高、可重复性好；操作简单；不影响被分离细胞或其它生物材料的生物学性状和功能等特点，在外加磁场作用下定向运动，使得某些特殊成分得以分离、浓集或纯化。

免疫磁微粒技术与化学发光免疫分析技术结合检测待测物，可大大提高检测的灵敏度和准确性，它以微米级磁微粒为载体，利用表面有机物提供的羧基活性基团与蛋白质氨基共价结合，采用抗体进行“搭桥”成免疫磁微粒，可进行抗原、抗体反应。该技术的新颖之处有：(1)采用微小的磁微粒作为固相可增加包被表面积，从而增加了抗体的有效包被量，不仅节省了抗体，而且有助于建立宽范围的免疫检测方法，尤其适合于高浓度临床样本的测定，避免弯钩效应的发生；(2)利用顺磁铁微粒为固相载体，外包被单克隆抗体，增加抗原、抗体的接触面积及底物发光面积，提高反应的灵敏度，并采用旋转磁场使磁微粒起搅拌作用及分离结合抗原-抗体与游离抗体的作用；(3)在液相反应中，使用发光增强剂，将水分子从发光底物的发光位点排开，同时还可缩短发光的达峰时间。