[发明专利]HPV 16型E7E6融合蛋白基因、表达载体、方法、细胞和用途

权利要求书

1.一种人乳头瘤病毒(HPV)16型E7E6融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白的氨基酸序列为SQE.ID.NO.1所示的序列。

2.一种用于编码权利要求1所述融合蛋白的DNA序列，其特征在于，所述DNA序列的核苷酸序列为SQE.ID.NO.2所示的序列。

3.一种用于表达权利要求1所述融合蛋白的表达载体，其特征在于，所述表达载体含有权利要求2所述的DNA序列；优选地，所述表达载体为重组腺病毒。

4.根据权利要求3所述的表达载体，其特征在于，所述重组腺病毒是复制缺陷型腺病毒，其是由腺病毒穿梭质粒和腺病毒骨架质粒共转染腺病毒包装细胞得到的；

优选地，所述腺病毒穿梭质粒选自pDC316、pDC311、pDC312和pDC315，其是通过将权利要求2所述的DNA序列插入至所述腺病毒穿梭质粒的Bgl II位点之间来构建的；和/或所述腺病毒骨架质粒为pBHGloxΔE1，3Cre；

进一步优选地，所述重组腺病毒所述包装细胞优选选自人胚肾293细胞、人胚肾293T细胞、人胚肾293FT细胞和人胚肾293F细胞。

5.一种用于表达权利要求1所述融合蛋白的哺乳动物细胞，其特征在于，所述细胞是由权利要求3所述的表达载体感染或转染得到的；

优选地，所述表达载体为重组腺病毒；

更优选地，所述哺乳动物细胞为人胚肾293细胞、人胚肾293T细胞、人胚肾293FT细胞和人胚肾293F细胞。

6.一种表达权利要求1所述融合蛋白的方法，其特征在于，该方法包括构建含有权利要求2所述DNA序列的表达载体，并使该表达载体在哺乳动物细胞中得到表达；

优选地，所述表达载体为重组腺病毒；

更优选地，所述细胞为人胚肾293细胞、人胚肾293T细胞、人胚肾293FT细胞和人胚肾293F细胞。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

1)将权利要求2所述的DNA序列插入至腺病毒穿梭质粒，构建出重组腺病毒穿梭质粒；

2)将步骤1)所构建的重组腺病毒穿梭质粒与腺病毒骨架质粒共转染人胚肾293细胞；

3)将步骤2)所得到的细胞进行离心后，用无菌PBS重悬细胞沉淀，反复冻融后，再次离心，上清液即为含重组腺病毒的原代病毒液；

4)将步骤3)中的原代病毒液进行单斑纯化，并通过PCR鉴定后筛选出正确的重组腺病毒；

5)将步骤4)中所筛选出的重组腺病毒在293细胞中传代扩增。

8.一种制备用于治疗人乳头瘤病毒(HPV)16型感染及相关疾病(如宫颈癌)药物的方法，其特征在于，该方法包括将权利要求2所述的DNA序列、权利要求3或4所述的表达载体、权利要求5所述的细胞用于表达权利要求1所述的人乳头瘤病毒(HPV)16型E7E6融合蛋白。

9.权利要求1所述的融合蛋白、权利要求2所述的DNA序列、权利要求3或4所述的表达载体、权利要求5所述的细胞在制备用于治疗人乳头瘤病毒(HPV)16型感染及相关疾病(如宫颈癌)药物中的应用；

优选地，所述药物为疫苗。

10.一种用于治疗宫颈癌的疫苗，其特征在于，所述疫苗包括权利要求1所述的融合蛋白、权利要求2所述的DNA序列、权利要求3或4所述的表达载体、或权利要求5所述的细胞。