[发明专利]线粒体天门冬氨酸氨基转移酶测定试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种线粒体天门冬氨酸氨基转移酶测定试剂盒。

背景技术

天门冬氨酸氨基转移酶存在两种同工酶，即线粒体天门冬氨酸氨基转移酶和细胞浆天门冬氨酸氨基转移酶。线粒体天门冬氨酸氨基转移酶和细胞浆天门冬氨酸氨基转移酶是1950被Hird和Rowsell发现并在1960年被Fleisher等用电泳确证的，实验表明：在碱性溶液中，线粒体天门冬氨酸氨基转移酶向阴极移动，而细胞浆天门冬氨酸氨基转移酶向阳极移动。

线粒体天门冬氨酸氨基转移酶和细胞浆天门冬氨酸氨基转移酶广泛存在于人体各种组织细胞中，以肝、心细胞含量最为丰富。其中线粒体天门冬氨酸氨基转移酶存在于线粒体内，而细胞浆天门冬氨酸氨基转移酶则存在于细胞浆内，属细胞内同工酶。细胞作为一个整体，其中的线粒体天门冬氨酸氨基转移酶含量占80％，而细胞浆天门冬氨酸氨基转移酶含量只占20％。

线粒体天门冬氨酸氨基转移酶和细胞浆天门冬氨酸氨基转移酶这两种同工酶都是由两条相同的多肽亚单位所组成，每个亚单位的相对分子量是46,000，整个酶的分子量是92,000。这两种同工酶在相应的基因组成上有差异，在氨基酸组成和免疫特性上不同。在细胞轻度损害时，主要是细胞浆内的细胞浆天门冬氨酸氨基转移酶透过细胞膜释放入血，而线粒体内的线粒体天门冬氨酸氨基转移酶有两层线粒体膜的保护，不易释放入血。线粒体内的线粒体天门冬氨酸氨基转移酶浓度一般比血清中的浓度高数千倍，当细胞炎症、坏死等使细胞严重损害时，线粒体天门冬氨酸氨基转移酶迅速释放入血，因此测定线粒体天门冬氨酸氨基转移酶作为判定肝脏、心脏的损害程度及预后的评价指标，对疾病的诊断、治疗、疗效及护理有重要价值。

线粒体天门冬氨酸氨基转移酶与CK、CK-MB及ALT相比，CK、CK-MB及ALT均为细胞质酶，当缺血、缺氧使细胞通透性改变时，即可释放入血，其增高不完全说明细胞坏死损伤，而此时线粒体中的线粒体天门冬氨酸氨基转移酶不释放入血，故同时测定细胞不同部位的酶可鉴别细胞损伤的程度。以线粒体天门冬氨酸氨基转移酶为细胞坏死指示酶，对肝细胞坏死的诊断有重要应用价值。如急性肝炎时，肝细胞内的线粒子体严重破坏，线粒体天门冬氨酸氨基转移酶升高。当肝细胞不再继续破坏时迅速下降，表示预后较好；反之，说明肝细胞仍继续坏死，疾病可能趋向慢性化。再如线粒体天门冬氨酸氨基转移酶在乙醇性肝炎时明显增高，说明该病为肝细胞坏死性损伤；线粒体AST与总AST的比值有助于鉴别诊断酒精性肝炎与其他肝病。肝脏手术前测定血清线粒体天门冬氨酸氨基转移酶，对手术的成功及预后有重要意义，对肝脏手术术前指征的判定有重要应用价值。

以线粒体天门冬氨酸氨基转移酶为细胞坏死指示酶，对急性心肌梗死的诊断也具有重要应用价值。线粒体天门冬氨酸氨基转移酶活性峰与总CK、CK-MB或细胞浆天门冬氨酸氨基转移酶的活性峰略相关，因此，可疑急性心肌梗死患者测定线粒体AST，能提供这类患者通常测定的酶及同工酶所不能提供的新信息。在缺氧阶段细胞膜通透性改变，CK酶和其他细胞浆酶就从细胞释放了，即使此时尚无细胞坏死。这些酶释放不是细胞坏死的标志。另一方面，CK和其他细胞浆酶反映心肌组织损害的面积，线粒体AST的释放更多地反映亚细胞坏死损伤的严重程度。心脏手术前测定血清线粒体天门冬氨酸氨基转移酶，对手术的成功及预后有重要意义，对心脏手术术前指征的判定有重要应用价值。

目前，血清中线粒体天门冬氨酸氨基转移酶的测定主要有电泳、层析法以及免疫学方法包括酶免、放免，免疫抑制法等。电泳、层析法测定时费时，难于自动化测定，不能用于临床大规模标本的应用。由于上述方法学的缺陷导致线粒体天门冬氨酸氨基转移酶的测试长期不能在临床上的到广泛开展，因而肝脏和心脏等脏器损伤的严重程度缺乏直接的指标。

发明内容

本发明的目的是提供一种不受细胞浆天门冬氨酸氨基转移酶的干扰，结果准确的线粒体天门冬氨酸氨基转移酶测定试剂盒，以弥补上述缺陷。

本发明的所提供的线粒体天门冬氨酸氨基转移酶测定试剂盒，含有试剂1和试剂2，所述试剂1含有天门冬氨酸蛋白酶、α-酮戊二酸、L-天门冬氨酸、苹果酸脱氢酶、乳酸脱氢酶、防腐剂和PEG6000；所述试剂2含有NADH、防腐剂和EDTA·2Na。