[发明专利]一种异戊烯基黄酮及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种异戊烯基黄酮，以及该化合物在制备治疗乳腺癌药物中的应用。

背景技术

小叶莲(Fructus Sinopodophylli)为常用藏药，中国药典2005年版收载其来源为小檗科植物桃儿七Podophyllum hexandrum Royle的干燥成熟果实。具有活血调经功能，常用于治疗多种妇科疾病。但是目前关于小叶莲的研究却少见报道。

目前，从小叶莲中分离得到的主要化合物有：

木脂素类(lignanoids)化合物：鬼臼毒素(podophyllotoxin)、去氧鬼臼毒素(deoxypodophyllotoxin)、4′-去甲去氧鬼臼毒素(4′-demethyldesoxypodophyllotoxin)。

黄酮类(flavones)化合物：槲皮素(quercetin)、8-异戊烯基山柰酚(8-prenylkaemferol)和柠檬酚(citrusinol)。

至今未见小叶莲及其化合物在抑制乳腺癌方面的报道。

发明内容

本发明的目的在于提出一种异戊烯基黄酮，以及该化合物在制备治疗乳腺癌药物中的应用。

本发明通过将小叶莲干燥粉碎，以80％～95％乙醇回流提取2～4次，每次0.5～2小时，回收乙醇，浓缩至60～80℃时相对密度为1.05～1.30的浸膏。将其均匀分散至水中，分别用石油醚、乙酸乙酯和水饱和正丁醇萃取，回收溶剂得到不同极性的萃取物；乙酸乙酯萃取部分经反复硅胶柱色谱(石油醚-丙酮或氯仿-甲醇洗脱)并通过Sephadex LH-20纯化、氯仿-甲醇洗脱，得到一个新化合物，将其命名为8，2′-二异戊烯基槲皮素3-甲醚(8，2′-diprenylquercetin3-methyl ether)。

8，2′-二异戊烯基槲皮素3-甲醚为黄色粉末，盐酸镁粉反应呈阳性。HR-ESI-MS：m/z453.19118[M+H]⁺，给出分子式C₂₆H₂₈O₇。¹H-NMR、¹³C-NMR、HSQC和HMBC数据见表1。该化合物为一新化合物，命名为8，2′-二异戊烯基槲皮素3-甲醚。

表1 8，2′-二异戊烯基槲皮素3-甲醚的核磁数据

其结构式如下：

该化合物对人乳腺癌细胞的抑制作用实验表明，其具有良好的抑制乳腺癌细胞的作用。

具体实施方式

实施例1

干燥小叶莲药材，粉碎后约18kg，以8倍量95％乙醇回流提取2次，提取时间分别为2小时和1小时，回收乙醇，浓缩至70℃时相对密度为1.10的浸膏约5.2kg。取约4.8kg，加10L蒸馏水充分搅拌至完全悬浮后，依次用石油醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇等体积萃取5次。萃取液减压回收溶剂，得各萃取部位。取乙酸乙酯部分274g，经硅胶柱(100～200目)色谱进行分离，氯仿-甲醇(10∶0～0∶10)梯度洗脱，根据TLC检测结果，在氯仿∶甲醇为40∶1～30∶1极性部位含有8，2′-二异戊烯基槲皮素3-甲醚，通过Sephadex LH-20纯化、氯仿-甲醇(6∶4)洗脱，得到8，2′-二异戊烯基槲皮素3-甲醚60mg。

实施例2

采用酸性磷酸酶法检测8，2′-二异戊烯基槲皮素3-甲醚对人乳腺癌细胞的抑制作用。

人乳腺癌MDA-231细胞株和人乳腺癌T47D细胞株均用含体积分数为10％新生牛血清、100U/mL青霉素、100U/mL链霉素的DMEM培养基培养，37℃，95％湿度，5％CO₂孵箱条件；常规2.5g/L胰蛋白酶消化传代。

取对数生长期细胞消化后，制成细胞悬液按1.5×10³/孔的密度接种于96孔培养板，培养24h细胞完全贴壁之后，实验组分别加入不同浓度的化合物；空白对照组加入DMEM培养液。实验中，每个浓度设6个平行孔，作用24h、48h、72h后，弃去96孔板中的培养基，各孔用PBS 100μL洗2遍，弃PBS，加入10mmol/L的硝基苯磷酸盐溶液100μL(0.1mol/L醋酸缓冲液配制，含0.1％Triton X-100)，置于37℃孵育2h后，每孔加入1mol/L氢氧化钠10μL终止反应。用酶联免疫检测仪在405nm处检测光吸收度(A值)记录结果，重复实验3次。结果表明，如表2所示，8，2′-二异戊烯基槲皮素3-甲醚具有较强的乳腺癌细胞抑制作用。