[发明专利]定量检测人血清中自体α-突触核蛋白抗体的方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种人血清中自体α-突触核蛋白抗体的检测方法，该方法可用于帕金 森病的诊断。

背景技术：

帕金森病(Parkinsonps disease，PD)是一种发病率仅次于老年痴呆的老年神经退 行性疾病，其主要病理特征以中脑黑质致密部多巴胺能神经元进行性丢失和残留 神经元胞浆内出现嗜酸性包涵体，称路易小体。α-突触核蛋白是构成路易小体的主 要成分，主要以聚集体的形式存在。在帕金森病的发病过程中，高水平的α-突触 核蛋白可形成对多巴胺能神经元具有毒性的变构形式，而这种变构形式有可能在 多巴胺能神经元死亡的局部微环境形成可导致自体抗体产生，进而在帕金森病人 的血清中出现自体α-突触核蛋白抗体水平增高。到目前为止，只有一篇文献报道 了在希腊的家族性帕金森病人血清中自体α-突触核蛋白抗体水平增高，而且存在 着病例少和定量方法不完善等缺陷。目前，帕金森病的诊断主要依靠运动症状和 医生的经验，有较高的误诊率。临床病理研究表明，在散发性帕金森病的诊断中， 至少有24％的误诊率。此外，由于帕金森病患者黑质多巴胺能神经元死亡特征表 现为进行性死亡，只有当黑质多巴胺能神经元死亡达到了70％左右时，才开始出现 运动症状，而这时已经是黑质多巴胺能神经元死亡的晚期。此时除了补充多巴胺 的对症疗法外，并无根治疗法，势必严重影响病人的生活质量和给社会和家庭增 加沉重的负担。因此早期发现、诊断帕金森病对于及时治疗、保护多巴胺能神经 元、延缓病情、改善患者的生活质量具有十分重要的意义。

本发明研究出检测人血清中自体α-突触核蛋白抗体的方法，可用于对帕金森病的 诊断，是筛选帕金森病高危人群和临床诊断帕金森病的重要手段。

发明内容：

本发明提供一种帕金森病的诊断方法，其中包括人血清中自体α-突触核蛋白抗体 的检测方法。

本发明用抗原(重组人α-突触核蛋白)和抗体(兔抗人α-突触核蛋白多克隆抗 体)制备成试剂盒，用抗原抗体反应原理检测帕金森病人和正常健康人血清中的 自体α-突触核蛋白抗体的存在数量并进行比较，试剂盒采用显色反应来判断人血 清中的自体α-突触核蛋白抗体的存在与否和数量多少。

本发明的帕金森病的诊断方法包括以下步骤：

步骤1、人α-突触核蛋白的制备

步骤2、抗α-突触核蛋白多克隆抗体的制备

步骤3、帕金森病人和正常健康人血清的制备

步骤4、人血清中自体α-突触核蛋白抗体的检测

步骤5、比较检测结果

本发明的疾病诊断方法包括使用诊断试剂对人血清中自体α-突触核蛋白抗体进 行检测。

因此本发明包括诊断试剂盒。

本发明的诊断试剂盒的组成包括：

抗原(重组人α-突触核蛋白)

抗体(兔抗人α-突触核蛋白多克隆抗体)

本发明的试剂盒还包括以下辅助组成成分用于抗原抗体的反应测定。

抗原稀释液(0.05M碳酸缓冲液，pH 9.6)

抗体与血清稀释液(10％BSA/PBS)

洗板液(0.1％(v/v)Tween-20/PBS)

封闭液(10％BSA/PBS)

标记二抗(AP-山羊抗兔IgG；AP-山羊抗人IgG)

显色底物(p-Nitrophenyl Phosphate Liquid Substrate System，Sigma)

96孔ELISA板。

本发明的试剂盒，各试剂分别包装，优选使用包装管，每个包装管中装入试剂的 量以够-个样本使用量为基本量，可以扩大到10个，100个，1000个样本的使 用量。

本发明还包括的人血清中自体α-突触核蛋白抗体的检测方法，该方法包括以下步 骤：

抗原(重组人α-突触核蛋白)和抗体(兔抗人α-突触核蛋白多克隆抗体)进行 反应，根据反应显色的差异判断人血清中的自体α-突触核蛋白抗体的存在与否和 数量多少。

采用本发明试剂盒进行检测的方法如下：

1)包板：人α-突触核蛋白(10μg/ml，碳酸缓冲液溶解)100μl/孔包被96孔 ELISA板，4℃，24小时。

2)洗板：用含0.1％(v/v)Tween-20的PBS(PBS-T)200μl/孔洗板3次，每次5 分钟。