[发明专利]鱼卵细胞提取物及其在诱导人成体细胞分化为多能干细胞中的应用

权利要求书

1、鱼卵细胞提取物，其特征在于，主要由以下方法取得：

一、取鱼卵细胞，用生理盐水清洗后置于容器中备用；

二、将装有鱼卵细胞的容器放入-80℃至-190℃低温冰箱或液氮中冷冻，待完全冻结后取出，在常温或不高于42℃温水中隔水融化完全，如此冻融，反复3-5次，使卵细胞破碎；

三、在冻融处理后的鱼卵细胞中按体积比1∶1加入生理盐水，充分搅均后，离心取得上清液，上清液再经过滤器过滤去除细菌和分子量大于等于20万道尔顿的大分子成份，取得二次上清液，测定并调整蛋白质浓度为4毫克/毫升，4℃保存备用，此为本发明的鱼卵细胞提取物。

2、如权利要求1所述的鱼卵细胞提取物，其特征在于，步骤二冻融后的鱼卵细胞，再置于研钵中研磨，使细胞完全破碎。

3、如权利要求1或2所述的鱼卵细胞提取物，其特征在于，所述鱼卵细胞来自于新鲜活鱼杀取或直接收购新鲜鱼卵。

4、如权利要求1或2所述的鱼卵细胞提取物，其特征在于，所述鱼是淡水鲤鱼、淡水鲫鱼或淡水草鱼中的一种。

5、如权利要求3所述的鱼卵细胞提取物，其特征在于，鱼卵是卵细胞卵黄充满时的鱼卵。

6、如权利要求1或2所述的鱼卵细胞提取物，其特征在于，离心条件是在1000rpm离心10分钟后，取上清液再3000rpm离心10-30分钟。

7、鱼卵细胞提取物在诱导人成体细胞分化为多能干细胞中的应用，其特征在于，按以下方法应用：

一、备人成体细胞，按常规方法分离培养获得人原代成体细胞，取该原代成体细胞或其增殖培养后第二代至第四代成体细胞备用；

二、诱导培养，将上述成体细胞接种于诱导培养基中，所述诱导培养基是按体积比，液体培养基DMEM/F12培养基∶鱼卵细胞提取物＝100∶1-10培养基，在37℃，5％CO₂，90％湿度条件下经过12-72小时培养，诱导出多能干细胞。

8、如权利要求7所述的鱼卵细胞提取物在诱导人成体细胞分化为多能干细胞中的应用，其特征在于，步骤一的人成体细胞原代至后代细胞密度达到70％-90％时，即为下一步的诱导培养时机。