[发明专利]一种用于防治烟叶仓库害虫的生防菌剂

说明书

技术领域：

本发明涉及一种用于防治烟叶仓库害虫的生防菌剂，属微生物技术领域。

背景技术：

烟草粉螟Ephestia elutella(Hübner)，属鳞翅目螟蛾科。在烟叶仓库害虫中是仅次于烟草甲的仓贮害虫。烟草粉螟广泛分布于世界热带及温带地区，国内分布于辽宁、甘肃、云南、贵州、四川、湖南、湖北、河南及江苏等地。在云南，烟叶仓库害虫以烟草粉螟为害最重，资料统计表明，每年因这种害虫造成的贮烟量损失占总贮量的0.5％～1％。烟草粉螟以幼虫危害烟叶，成虫不吃食物。幼虫喜吃含糖高、尼古丁低的烤烟和香料烟。

目前，防治烟叶仓库害虫主要应用熏蒸剂(如磷化铝)薰蒸。但是近年来，国内外对环境保护日益重视，要求减少和禁止使用剧毒薰蒸剂的呼声高涨，氰化氢、溴甲烷、磷化铝等已相继被禁用，在烟叶仓库中使用磷化铝，由于操作不当易造成火灾，且仓库需要良好的密封性能。由于人类对环境保护及自身健康意识的增强，生物防治已成为人们研究的热点。

发明内容：

本发明的主要目的在于克服现有技术之不足，而提供一种使用安全、烟叶及环境污染低的用于防治烟叶仓库害虫的生防菌剂，为烟叶的贮存提供技术支持。

本发明采用的是苏云金杆菌幕虫亚种Bacillus thuringiensis subsp.finitimus菌株10，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；地址：中国北京市朝阳区北辰西路1号院；保藏日期：2009年2月6日；保藏登记入册的编号CGMCCNO.2896。菌株10属于苏云金杆菌，系本发明人从大量复烤烟叶里分离出的苏云金杆菌中筛选出来的，对烟草粉螟具有较好防治效果。本发明人通过13项生理生化试验结果与已知的29个苏云金杆菌亚种的生理生化指标比较，鉴定为科尔默亚种finitimus，血清型H₂。

本发明的生物菌剂经如下工艺制成：

试管种子培养：将菌株10接种到试管斜面培养基上，试管斜面培养基(重量百分比)配方为：牛肉膏5％，蛋白胨1.0％，琼脂2.0％，氯化钠0.5％，pH8.0；30℃恒温培养2天，获得试管种子；

液体发酵：采用试管培养的苏云金杆菌菌株10原种，按试管原种→三角摇瓶→发酵罐的三级工艺培养。在30L发酵罐中，装入20L液体发酵培养液，液体培养基(重量百分比)配方为：玉米粉0.5％、黄豆粉2.0％、酵母粉0.10％、蛋白胨0.075％、磷酸二氢钾0.75％、碳酸钙0.15％和硫酸镁0.035％，0.025％植物油作消泡剂，初始pH值为7.5。经0.05mpa灭菌30分钟，冷却至室温接入1.8L菌株10液体种子，接种量为9％(体积比)，发酵温度为30℃，通气量为15％(体积比)，搅拌速度为150r/min，发酵时间为36h。

制备生防菌剂：将经液体发酵后的培养液在5℃下，用高速离心机5000g离心20分钟，去除上清液→离心后的沉淀物用冻干超滤仪在室温下冻干→粉碎成粉直接作为杀虫剂使用，制成的菌粉活芽孢数1.44×10¹⁰个/ml。

本发明的生防菌剂具有使用安全、烟叶及环境污染低的优点，能广泛用于烟叶贮存仓库中害虫的生防。

具体实施方式：

一、生防菌剂的制备

本发明的生物菌剂经如下工艺制成：

试管种子培养：将菌株10接种到试管斜面培养基上，试管斜面培养基(重量百分比)配方为：牛肉膏5％，蛋白胨1.0％，琼脂2.0％，氯化钠0.5％，pH8.0；30℃恒温培养2天，获得试管种子；

液体发酵：采用试管培养的苏云金杆菌菌株10原种，按三角摇瓶→种子罐→发酵罐的三级工艺培养。在30L发酵罐中，装入20L液体发酵培养液，液体培养基(重量百分比)配方为：玉米粉0.5％、黄豆粉2.0％、酵母粉0.10％、蛋白胨0.075％、磷酸二氢钾0.75％、碳酸钙0.15％和硫酸镁0.035％，0.025％植物油作消泡剂，初始pH值为7.5。经0.05mpa灭菌30分钟，冷却至室温接入1.8L菌株10液体种子(接种量为9％)，发酵温度为30℃，通气量为15％，搅拌速度为150r/min，发酵时间为36h。

二、本发明生防菌剂防治烟草粉螟的功能试验

1、菌株10对幼虫生长发育的影响

设100、200、300倍三个浓度。以喷无菌水为对照。喷(菌)液量为20μl/g菌剂处理烟叶后置于养虫室，温湿度为自然温湿度。每试验浓度接虫15头，三次重复。试验处理后7天调查烟草粉螟的死亡情况。