[发明专利]一种提高烟叶含钾量的生物菌剂

说明书

技术领域：

本发明涉及一种提高烟叶含钾量的生物菌剂，属生物技术领域。

背景技术：

烟叶含钾量偏低是影响我国烟叶质量的主要原因之一。含钾量高的烟叶，富有弹性和韧性，填充性强，色泽呈深桔黄色香气足，阴燃持火力、燃烧性和吃味较好。增施钾肥是提高烟叶含钾量和改善烟叶品质的主要途径。过去30年以来，土壤增施钾肥成为烟草科学研究中最受关注的领域之一，在提高烟叶含钾量上取得了显著的成绩。

随着人们对吸烟与健康问题的广泛关注及减少公害、保护环境运动的兴起，烟草业如何在既能满足消费者的需求，又能减少公害、保护环境上面临严重挑战。目前，提高烟叶品质，必须增加烟叶含钾量，必须要向植烟土壤中增施钾肥，以便增加土壤速效钾含量。利用解钾细菌溶解土壤耦合的难溶性钾，可减少钾肥的施用量，可使土壤中难溶性钾转变为可溶性钾，实现土壤含钾量的净积累，从而提高烟叶含钾量。因此，研究开发具有实际应用价值提高烟叶含钾量的新技术具有重要的现实意义和广阔的应用前景。

发明内容：

本发明的主要目的在于提供一种能提高烟叶含钾量的生物菌剂，为生产优质烟叶提供技术支持。

本发明采用的细菌是Roseateles sp.G05菌株，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；地址：中国北京市朝阳区北辰西路1号院；保藏日期：2009年1月8日；保藏登记入册的编号CGMCC N0.2852。

G05菌株属于土壤细菌，系本发明人从大量土壤细菌菌株中筛选出来的，具有显著提高烟叶含钾量的能力，经中国农业科学院中国农业微生物菌种保藏管理中心(ACCC)进行鉴定，G05菌株介于Mitsuaria chitosanitabida和Roseateles depolymerans两个种属之间，与两个种的部分16S rRNA的Blast比对后，相似性均为99％，从进化树的角度看与Roseateles属更为接近。初步定为Roseateles sp.(未知种)。

本发明Roseateles sp.G05菌株主要特征为：杆状，无芽孢，革兰氏染色阴性，葡萄糖发酵阴性，接触酶阳性，氧化酶阳性，VP试验阴性，硝酸盐还原阳性。

本发明是这样实现的：G05菌株的试管种子培养，摇床扩大培养制备为生物制剂，将制剂应用于大田植烟土壤中，烟叶成熟调制后测定烟叶含钾量。

本发明细菌G05菌株的培养方法(以下为重量百分比)：

1、试管种子培养

试管斜面培养基配方为：牛肉膏0.5％、蛋白胨1.0％、琼脂2.0％、氯化钠0.5％、pH7.4。

将G05菌株接种到试管斜面培养基上，30～32℃恒温培养1～2天，获得试管种。

2、液体发酵培养

液体发酵培养基配方为：牛肉膏0.5％、蛋白胨0.5～0.8％、磷酸氢二钾0.2～0.4％、氯化钠0.3～0.6％、pH7～7.5。

将试管种子接种到500ml三角瓶液体培养基中，每瓶装200ml，于28～32℃摇床培养，培养时间3～5天，转速为150～200r/min，培养液下摇床后用稀释平板计数法测定菌悬液浓度，菌浓度为每ml活菌数≥10⁷。即得具有提高烟叶含钾量功能的生物制剂。本发明生物制剂提高烟叶含钾量功能试验

1、制备生物制剂：按前述G05菌株的培养方法制备试验用制剂；以未接种G05菌株的液体培养基处理作为对照。

2、生物制剂对烟草处理方法

烤烟K326品种(纯氮施用量7克/株，N∶P₂O₅∶K₂O＝1∶1∶2)，烟苗大田移栽后15天，将供试菌剂每株浇施100毫升，其余按优质烟生产技术常规管理，烟叶成熟后分叶位采摘按常规烘烤调制。

3、烟叶钾含量测定方法

烟叶钾含量按《烟草及烟草制品钾的测定火焰光度法》YC/T 173～2003方法测定。烟叶钾含量提高百分率的计算方法为：

钾含量提高百分率％＝(制剂处理烟叶钾含量-对照处理烟叶钾含量)/对照处理烟叶钾含量×100

4、试验结果

表1生物制剂处理提高烟叶钾含量测定结果

叶位：从烟株第一片脚叶往上计数编号。注：数据由云南省烟草科学研究所分析测试中心分析.

结果表明，生物制剂处理的第5、10、14叶位烟叶钾含量分别比对照提高15.79％、28.89％、20.82％，表明本发明的生物制剂具有提高烟叶钾含量的功能。

本发明的生物制剂具有能提高烟叶钾含量的优点，能广泛应用于烟叶的种植。