[发明专利]蛋白免疫印迹实验中两种抗体同时标记的方法

权利要求书

1、蛋白免疫印迹实验中两种抗体同时标记的方法，其特征在于包括蛋白定量、聚丙烯酰胺凝胶电泳、转膜、封闭、抗体标记、显影步骤。

2、如权利要求1所述的方法，其特征在于其中蛋白定量步骤采用A液与B液以50：1的比例混合的BCA试剂定量所提取的蛋白，将蛋白提取液与BCA试剂加于酶标板，37℃30min后测0D562，再根据标准蛋白所做的标准曲线计算出所提取蛋白浓度，根据蛋白浓度来确定电泳时蛋白加样量。

3、如权利要求1所述的方法，其特征在于其中聚丙烯酰胺凝胶电泳步骤采用蛋白定量步骤确定出的蛋白加样量加入蛋白，胶浓度15％，电泳条件180v，100mA，35min。

4、如权利要求1所述的方法，其特征在于其中转膜步骤用转膜条件100v，350mA，75min将蛋白转至PVDF膜。

5、如权利要求1所述的方法，其特征在于其中封闭步骤是转膜结束后，将PVDF膜取出，用7％脱脂奶TPBS液封闭，4℃过夜。

6、如权利要求1所述的方法，其特征在于其中抗体标记是将PVDF膜从脱脂奶中取出，用TPBS洗膜两次，每次5min，标记一种抗体，室温75min，洗膜三次，每次5min后，再标记第二种抗体，室温75min，洗膜三次10min，两次5min后即可显影。

7、如权利要求6所述的方法，其特征在于其中两种抗体优选两种特异性较好的一次抗体，相互之间没有相同的抗原结合位点。