[发明专利]一种真菌诱导龙血树活叶片产生血竭的方法

说明书

所属技术领域：本发明属于生物制药领域

技术背景

血竭(Dragon’s blood或Resina Draconis)是一种传统名贵中药，有活血化瘀、镇痛止血、消炎抗菌等功效，在我国有悠久的用药历史，但历来依靠进口。在自然状态下，龙血树树干木质部在受到损伤或微生物侵染后，植物会产生防御反应，形成防御性物质来抵抗微生物侵染，这种防御性物质经提取后就是药用血竭。1972年我国医药工作者在云南、广西等地发现了能产生血竭的剑叶龙血树[Dracaena cochinchinensis(Lour.)S.C.Chen]。1999年国家药品监督管理局颁布的国家标准中(WS3-082(Z-016)-99(Z))，血竭以一类新药材收载。随着需求的增长，野生龙血树资源遭到了严重破坏。龙血树生长极为缓慢，几十年树龄的树干才能用于血竭生产，而且血竭产量很低。依靠人工繁殖龙血树，在树干上诱导血竭形成来解决血竭的药源问题困难很大。

在龙血树资源研究方面，李宗恒等人申请了专利《剑叶龙血树种苗培育方法(CN101116397A)》、《剑叶龙血树栽培方法(CN101116398A)》，刀祥生等人申请了《一种剑叶龙血树的扦插繁殖方法(200510010881.6)》的专利。龙血树树干木质部形成伤口后，龙血树会产生防御反应而形成血竭，刘宝等人据此原理申请了《一种快速获得龙血竭原料的方法(CN101138305A)》的专利。在龙血树的伤口上施用植物激素，可以增加血竭的产量，杨本鹏等人据此原理申请了《一种人工栽培龙血树诱导生产血竭的方法(CN101032207A)》的专利。在伤口上接种微生物，也可以刺激龙血树产生较多的血竭，王兴红等人发表了相关的研究论文(王兴红，江东福，马萍等，真菌与龙血树血竭形成关系的初步研究，中国青年科学技术论文精选，中国科学技术出版社，1994，11，500-503；江东福，马萍，王兴红等，龙血树真菌群及其对血竭形成的影响，1995，云南植物研究，17(1)：79-82。)；宋启示等据此原理申请了《一种田间人工诱导生产龙血竭的方法(CN1817105A)》、《一种龙血竭人工诱导剂及其制备方法(CN1821387A)》、《一种龙血竭的人工培育方法(CN1821388A)》的专利。杨本鹏等人还提出了利用组织培养方法生产血竭的专利申请《运用龙血树组织培养生产血竭的方法(CN1316876C)》。针对龙血树树叶诱导产脂问题，王兴红提出了《一种碱处理龙血树活叶片诱导血竭产生的方法》的专利申请。

这些方法虽然在一定程度上有望缓解龙血树的资源问题和血竭形成问题，但除了组织培养的方法外，这些专利方法都必须利用活体龙血树树干的木质部，而树干的生长又是极其缓慢的，对树干的利用也只能是一次性的。组织培养存在培养时间长、成本高等问题，无法较快地满足现实生产的紧迫需要。碱法处理龙血树叶片诱导产脂的效果有不稳定的情况。

自然状态下龙血树的树叶生长较快，而且每年都会衰老枯死一批，还可以通过快速培养龙血树苗迅速得到大量的龙血树叶片，所以利用龙血树活叶片诱导生产血竭，可以重复利用珍贵的龙血树。目前，尚未发现有利用真菌诱导龙血树活叶片生产血竭的专利申请或方法报道。经过申请人的研究表明：利用真菌诱导龙血树叶片产脂完全不同于在树干上用真菌诱导产脂的方法，除了部位不同外，所用的菌种种类更多，接种方式也不同，是一种新颖的诱导方案。在自然状态下，龙血树树干可以自发形成血竭，而树叶则很少会形成血竭。形成人工诱导龙血树叶片生产血竭有望解决血竭生产原料严重短缺的局面，满足人民群众的用药需求，又有助于保护自然资源。

发明内容

本发明使用真菌处理龙血树叶片，龙血树叶片受到真菌的刺激后会产生防御反应，形成的反应产物就是血竭。

本发明所述的真菌诱导龙血树活叶片形成血竭的方法由以下步骤组成：

一、用琼脂固体平板培养基培养有诱导效果的真菌。

二、将培养好的真菌连同固体培养基接种于生长健壮的龙血树叶片上。

2.1不损伤叶片，将真菌连同固体培养基直接接种于幼嫩的龙血树叶片上，用塑料布包裹菌体培养物保湿。

2.2对于较老的叶片，可以用针状物以点状人为刺伤叶片，但损伤面不可过大，将真菌连同固体培养基接种于龙血树叶片的刺伤部位，用塑料布包裹真菌培养物保湿。

三、龙血树叶片接种诱导真菌以后，按正常栽培条件管理，1-3周内即可在叶片受损处产生红色的血竭。

四、2-3个月后，将产生血竭的叶片收获后，采下叶片上的红色部位，干燥后用甲醇或乙醇浸泡含脂叶片，然后蒸发掉溶剂，提取物经干燥后即可得到红色血竭。