[发明专利]一种脑膜炎奈瑟氏菌培养基

说明书

技术领域

本发明涉及一种培养基，尤其是一种适宜脑膜炎奈瑟氏菌较大规模培养的改良培养基，属于生物技术领域。

技术背景

流行性脑脊髓膜炎，简称流脑，是由奈瑟菌属的脑膜炎奈瑟氏菌所引起的急性呼吸道传染病。由于发病急，病情发展快，死亡率高，对易感人群——儿童暴发型病死率可达40％～60％，因而一直受到国内外的普遍重视。

虽然对脑膜炎奈瑟氏菌研究甚早，并取得一定成果，但是其培养方面的相关报道很少，且各个厂家对其培养基更是保密。阚方琦等(CN 101089190A)发明了一种营养血液培养基，主要提供一般标本和已使用过抗生素及磺胺药的病人标本分离培养用，不适合于大规模培养，具有局限性。目前国内外较多应用巧克力双抗琼脂作为分离培养基，该培养基的分离检验效果很好，但因制作时需使用新鲜脱纤维羊血，具有材料来源不易，造价高，制作过程复杂等缺点，不适宜大规模增菌使用。另外目前的脑膜炎培养基多为分离培养基，其主要目的是分离和检出，故为了分离检出，现有培养基要使用抗菌素。

由于脑膜炎奈瑟氏菌对环境的要求非常苛刻，其生长不仅与菌种本身特性有关，如属专性需氧菌，培养过程中常因菌体产生自溶酶而导致自身裂解死亡，必须赋予合适的培养基才能使其良好生长代谢。因此，完全有必要研制并开发适合工业规模化生产，且材料来源广，价格低，能避免菌体产生自溶酶的适应脑膜炎奈瑟氏菌生长代谢的培养基。

发明内容

本发明正是为克服现有技术存在的上述不足，提供一种既能保证脑膜炎奈瑟氏菌生长旺盛，进行正常代谢，又能提供大规模增菌以用于生产疫苗的脑膜炎奈瑟氏菌培养基。

本发明通过下列技术方案完成：一种脑膜炎奈瑟氏菌培养基，其特征在于由下列组份组成：

氯化钠      3.0～8.0g/L        氯化钾    0.05～0.2g/L

磷酸氢二钠  1.0～6.0g/L        L-谷氨酸  5～20g/L

L-精氨酸    0.01～0.1g/L       L-色氨酸  0.001～0.01g/L

L-半胱氨酸  0.005～0.030g/L    氯化钙    0.01～0.1g/L

硫酸亚铁    0.001～0.008g/L    硫酸镁    0.1～1.0g/L

大豆蛋白胨  5.0～20.0g/L       葡萄糖    5.0～20.0g/L。

本发明提供的培养基通过下列方法制备：

A、将氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、L-谷氨酸、L-精氨酸、L-半胱氨酸、氯化钙、硫酸亚铁、大豆蛋白胨混合物用蒸馏水溶解后，定容，调节pH至7.2-7.4，在113～117℃，0.06～0.08MPa条件下，灭菌15～25min；

B、将L-色氨酸、硫酸镁、葡萄糖混合物用15mL蒸馏水溶解后，0.2μm一次性滤器过滤除菌后，加入已高压除菌的A步骤的混合物中，得液体培养基。

本发明提供的培养基具有如下特点：含有脑膜炎奈瑟氏菌生长代谢所需的营养要求，用于大规模扩增已纯化的脑膜炎奈瑟氏菌，其中L-谷氨酸是生物体内氮代谢的基本氨基酸之一，脑膜炎奈瑟氏菌不具有还原硫酸盐能力，故要配入属还原型硫化物的L-半胱氨酸，L-精氨酸是细菌内鸟氨酸循环的组成成分，具有维持氮平衡的作用；氯化钙中的钙离子能促进生长；硫酸镁中的镁离子能缩短延滞期；硫酸亚铁中的铁离子能影响菌株的毒力并有利于菌落的扩大；葡萄糖有利于脑膜炎奈瑟氏菌的繁殖生长。

本发明与现有技术相比具有下列优点和效果：本发明提供一种可以用于疫苗生产的大规模增菌培养基，所采用的材料和工艺均以疫苗生产为最终目的。采用上述培养基培养脑膜炎奈瑟氏菌，有利于细菌的生长代谢，与其他培养基相比能获得较高产量，且材料来源广泛，不含其他动物组织成分，如血清等，可有效排除外源的干扰，在生产上能获得较高纯度的细菌用于疫苗生产，使工艺简化，易于操作，使用本发明提供的液体培养基进行大规模培养，可有效扩增脑膜炎奈瑟氏菌，获得纯化的细菌以供疫苗生产。

具体实施方式

实施例1

按下列配方备料：

氯化钠      5.8g     氯化钾    0.09g

磷酸氢二钠  2.6g     L-谷氨酸  15.0g

L-精氨酸    0.03g    L-色氨酸  0.0025g

L-半胱氨酸  0.012g   氯化钙    0.021g

硫酸亚铁    0.002g   硫酸镁    0.6g