[发明专利]早老综合征所致ALT肿瘤的特有p53突变蛋白-p53N236S及其应用

说明书

技术领域

本发明具体地，涉及一种肿瘤抑制基因p53的点突变导致的突变蛋白p53N236S 及其功能，该突变蛋白功能的发现可应用于肿瘤诊断、抗肿瘤药物的筛选及肿瘤治 疗策略的制定，属于生物技术领域。

背景技术

人类的早老综合症(Werner Syndrome，WS)是一种常染色体隐性突变遗传病， 表现为明显的提早衰老(premature aging)及寿命缩短，平均存活年龄只有46-48 岁。常见病症还包括软组织骨肉瘤(soft tissue sarcoma)、早发性动脉粥样硬化、 出血性心脏病、骨质疏松、白内障、二型糖尿病等(Epstein，Martin et al.1966)。 Salk等分离出WS病人的成纤维母细胞，发现这些细胞的染色体极其不稳定，呈现 所说的马赛克染色体(translocation mosaicism)(Salk，Au et al.1981)。进 一步的研究发现，WS是由于Wrn基因突变引起的。Wrn基因编码的WRN蛋白属于 DNA解旋酶RecQ家族，参与DNA复制、重组及DNA损伤修复，因此在维持染色体的 稳定性方面起着关键作用。在人类疾病中，RecQ家族基因突变导致肿瘤易感性 (cancer predisposition)，如Bloom氏综合症(Bloom’s Syndrome)。很重要的 是，只有WS表现出明显的提早衰老的症状。因此，WS是人类研究人类衰老与染色 体不稳定性、肿瘤发生的相关性的很好的模型。

为了建立早老综合症的小鼠模型，两个不同的实验室的研究者试图在小鼠中敲 除Wrn基因。然而，单独敲除Wrn基因的小鼠(Wrn^-/-)并不表现早衰的症状(Lebel and Leder 1998；Lombard，Beard et al.2000)。进一步的研究发现，WS病人的 成纤维母细胞的端粒缩短(telomere erosion)较快，过量表达端粒酶的蛋白组分 TERT可以缓解端粒缩短，并且缓解细胞的衰老(senescence)(Wyllie，Jones et al. 2000)。这一发现提示了端粒缩短引发的端粒功能异常是导致WS病人早老病症的关 键。同时，这一发现也提示了单独敲除Wrn基因的小鼠不表现早衰症状的原因。人 的体细胞端粒酶活性低于检测水平，同时，人的体细胞端粒长度也较短(12-20kb)。 与人类不同，小鼠体细胞仍然保持端粒酶的活性，且端粒长度在15-80kb，不会导 致端粒功能异常，因而Wrn^-/-小鼠不表现出早衰的症状。基于这一假说，Dr.Sandy Chang在世界上首次成功地建立了WS的小鼠模型。该模型双重基因敲除了端粒酶 的RNA组分mTerc与Wrn基因(mTR^-/-Wrn^-/-)，忠实地再现了人类早老综合症的症状， 如端粒快速缩短，毛发变白、脱落，白内障、二型糖尿病、骨质疏松，缺血性心脏 病，骨肉瘤等等。由于小鼠体细胞端粒长度在15-80kb左右，敲除端粒酶活性的 小鼠仍然需要繁殖到第4-6代(G4-G6)才表现出早老综合症的症状，进一步证实 了端粒功能异常是导致早老综合症的关键。在这一模型中，端粒酶基因被敲除，所 以该模型产生的肿瘤是ALT(Alternative Lengthening of Telomeres)肿瘤(Chang， Multani et al.2004)。