[发明专利]乌贼胚胎发育及核行为观察的荧光染色方法

权利要求书

1、乌贼胚胎发育及核行为观察的荧光染色方法，其特征是具有如下步骤：

①选取乌贼卵，剥离外层卵膜并且只保留最内一层卵膜；

②将步骤①处理后的乌贼卵浸没在固定液中4℃保存，并且保存期间更换所述的固定液2次至4次；

③将经步骤②固定的乌贼卵用缓冲液冲洗2次至3次后，再用荧光染色剂进行染色，并且染色过程在黑暗环境下进行；

④将经步骤③处理后的所述的乌贼卵的动物极小头切下，平铺在载玻片上，并在荧光显微镜下拍照成像。

2、根据权利要求1所述的乌贼胚胎发育及核行为观察的荧光染色方法，其特征是：步骤②中所述的固定液按重量分数含有戊二醛2份至4份、多聚甲醛2.5份至5份、过滤海水90份至96份。

3、根据权利要求2所述的乌贼胚胎发育及核行为观察的荧光染色方法，其特征是：步骤③中的染色剂为4，6-二脒基苯基吲哚，染色时间为30min至50min。

4、根据权利要求2所述的乌贼胚胎发育及核行为观察的荧光染色方法，其特征是：步骤③中的染色剂为Hoechst33258荧光染料，染色时间为5min至8min。

5、根据权利要求3或4所述的乌贼胚胎发育及核行为观察的荧光染色方法，其特征是：所述的缓冲液为pH7.4的磷酸缓冲液。

6、根据权利要求5所述的乌贼胚胎发育及核行为观察的荧光染色方法，其特征是：步骤④中，所述的荧光显微镜的观察波长为360nm至370nm。

7、根据权利要求6所述的乌贼胚胎发育及核行为观察的荧光染色方法，其特征是：步骤①所述的乌贼卵的长径为7.5mm至15.0mm、短径为6.5mm至9.0mm；所述的乌贼卵的内的卵黄长径为3.0mm至3.6mm、短径为2.3mm至2.9mm。

8、根据权利要求5所述的乌贼胚胎发育及核行为观察的荧光染色方法，其特征是：所述的过滤海水中含有磷酸缓冲液，并且所述的磷酸缓冲液在所述的过滤海水中的浓度为0.1mol/L。

9、根据权利要求6所述的乌贼胚胎发育及核行为观察的荧光染色方法，其特征是：所述的过滤海水中含有1g/m³至100g/m³的EDTA钠盐。