[发明专利]利用大孔树脂制备细梗香草总皂苷提取物的方法及用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种植物提取物的制备方法，尤其涉及一种利用大孔树脂制备细梗香草总皂苷提取物的方法及用途。

背景技术

细梗香草，又名排草、香排草、香草、毛柄珍珠菜，系报春花科(Primulaceae)珍珠菜属植物，主要分布在我国西南华南地区。民间用于治疗感冒咳喘、风湿痛、抗肿瘤、月经不调、神经衰弱、补虚、驱蛔。关于细梗香草的活性成分研究，多为田景奎教授研究，国内外少见报道，通过对细梗香草全草化学成分进行了研究，从中共分离得到了16个化合物，包括13个皂苷和3个黄酮，13个皂苷均为新化合物。包括三种类型皂苷元，其中两种皂苷元3β，16α，22α-三羟基-28→13-内酯-齐墩果烷和3β，22α-二羟基-15α，16α-环氧-齐墩果-12-烯为首次报道，糖有三糖、四糖、五糖。对细梗香草总皂苷进行抗肿瘤活性研究，发现细梗香草总皂苷有非常强的抑制卵巢癌细胞A2780细胞的作用(IC50 0.1μg/mL)，有很好的开发前景。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种利用大孔树脂制备细梗香草总皂苷提取物的方法及用途。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：一种利用大孔树脂制备细梗香草总皂苷提取物的方法，该方法为：取细梗香草药材粉碎或用细梗香草饮片，加入质量体积比为6～15倍量的水或含水乙醇，含水乙醇中乙醇的体积比为10％-95％，加热回流提取2～4次，每次1～3h，过滤，合并提取液，浓缩至相对密度1.1～1.3；过滤或离心后通过填充有大孔树脂的层析柱，提取液中的细梗香草总皂苷与大孔树脂的重量比为1∶5～10，上柱流速1～4BV/h，树脂径高比为1∶3～1∶9；用水洗涤大孔树脂3～8BV，洗脱流速为2～4BV/h，水洗脱液弃去；用体积比为20～95％含水乙醇洗脱大孔树脂，流速为2～4BV/h，收集乙醇洗脱液；乙醇洗脱液减压浓缩至相对密度为1.1～1.25，减压或喷雾干燥，得细梗香草总皂苷提取物。

进一步地，所述的大孔树脂为聚苯乙烯型大孔树脂。

一种上述方法制备的细梗香草总皂苷提取物在用于制备治疗肿瘤的药物方面的用途。

本发明的有益效果是：本发明采用的大孔树脂对细梗香草总皂苷的吸附量大，被解吸完全，所得总皂苷的含量高，因此，可以显著提高细梗香草总皂苷的提取率，降低生产成本。细梗香草总皂苷提取物具有显著的抗肿瘤作用，可以用于制备治疗肿瘤的药物。

具体实施方式

大孔吸附树脂是指由苯乙烯、α-甲基苯乙烯、甲基丙烯酸甲酯、丙腈等为原料加入一定量致孔剂二乙烯苯聚合而成的球状颗粒，直径一般在0.3-1.25mm之间。

本发明细梗香草总皂苷提取物的制备方法为：取细梗香草药材粉碎或用细梗香草饮片，加入质量体积比为6～15倍量的水或含水乙醇，含水乙醇中乙醇的体积比为10％-95％，加热回流提取2～4次，每次1～3h，过滤，合并提取液，浓缩至相对密度1.1～1.3；过滤或离心后通过填充有大孔树脂的层析柱，提取液中的细梗香草总皂苷与大孔树脂的重量比为1∶5～10，上柱流速1～4BV/h，树脂径高比为1∶3～1∶9；用水洗涤大孔树脂3～8BV，洗脱流速为2～4BV/h，水洗脱液弃去；用体积比为20～95％含水乙醇洗脱大孔树脂，流速为2～4BV/h，收集乙醇洗脱液；乙醇洗脱液减压浓缩至相对密度为1.1～1.25，减压或喷雾干燥，得细梗香草总皂苷提取物。

其中，离心的转速为4000～16000转/分钟；大孔树脂为聚苯乙烯型大孔树脂。

上述方法得到的提取物中细梗香草总皂苷重量含量为20％～70％、细梗香草苷B重量含量不低于10％。

细梗香草总皂苷的抗肿瘤实验

体外抗肿瘤细胞筛选实验

实验方法

a细胞培养：

运用组织细胞培养技术培养各类肿瘤细胞，细胞接种于含10％新生牛血清RPMI-1600培养液中。培养环境为5％CO₂，37℃及饱和湿度。细胞传代为2～3d。贴壁细胞以0.25％胰蛋白酶消化适当后1∶3传代。悬浮细胞离心收集后传代。

b.体外细胞生长抑制实验(MTT法)