[发明专利]一种提取金针菇菌丝体胞内多糖的工艺组合及其确定方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物制药生产技术，具体地说是一种提取金针菇菌丝体胞内多糖的工艺组合及其确定方法。

背景技术

金针菇学名毛柄金钱菌，金针菇是秋冬与早春栽培的食用菌，以其菌盖滑嫩、柄脆、营养丰富、味美适口而著称于世。据测定，金针菇氨基酸的含量非常丰富，高于一般菇类，尤其是赖氨酸的含量特别高，赖氨酸具有促进儿童智力发育的功能。金针菇干品中含蛋白质8.87％，碳水化合物60.2％，粗纤维达7.4％，经常食用可防治溃疡病。最近研究又表明，金针菇内所含的一种物质具有很好的抗癌作用。金针菇既是一种美味食品，又是较好的保健食品。

金针菇多糖广泛应用在医药、食品等领域，市场需求量与日俱增，但目前金针菇多糖的生产几乎都是从子实体中提取，金针菇野生资源缺乏，人工栽培的周期长，占地面积大，又受季节限制，从而影响了金针菇的充分利用。利用深层发酵技术生产金针菇菌丝体多糖，其生物功效和金针菇子实体多糖几乎相同，而其生产周期短、成本低、产量大，具有工业化的生产前景。

在深层发酵中形成的金针菇菌丝体多糖分胞外多糖和胞内多糖两部分，而胞内多糖占了60-90％，是金针菇多糖菌丝体多糖的主要来源。常用的提取多糖方式有热水浸提法、酸浸提取法、碱提取法、酶提取法等。由于菌丝体细胞壁的存在，细胞内的组分难以顺利释放到胞外，细胞内外的果胶质和蛋白质等非多糖物质也使多糖的提取效率和纯度受到影响，传统的一些提取多糖方式致使金针菇多糖的提取过程耗时长、提取率低、提取物中多糖含量相对较低，或者因化学试剂的反应而破坏了多糖的分子活性构像。因此，寻找高效的多糖提取方法是发展金针菇菌丝体多糖是这一领域的关键。

天然药用成分大多为细胞内产物，提取时多需进行细胞破碎，而现有的机械和化学方法有时难于取得理想的破碎效果。将超声波技术应用于金针菇菌丝体多糖的提取，是利用超声波产生的强烈振动、高加速度、强烈的空化效应、搅拌等作用，加速有效成分进入溶剂，从而提高浸出率，缩短提取时间，同时可避免对提出成分的影响。此技术在中药有效成分提取、分离与制备工艺中已被广泛应用。

在菌丝体多糖的提取过程中，还可利用合适的酶，在较温和的条件下将细胞组织分解，加速有效成分的释放，从而提高多糖得率。将纤维素酶、果胶酶及蛋白酶组成的复合酶用于多糖的提取，以除去细胞壁胞和细膜上的果胶、纤维素及蛋白质等成分，使得菌丝体细胞顺利破裂，有利于促进胞内多糖的溶出，以达到提高提取率、缩短提取时间、减少能耗和有效保存多糖生物活性的目的。但由于加酶提取会提高生产成本，同时也给产物的分离带来困难，在添加量上要严格控制。

发明内容

本发明的目的在于，利用超声波作为辅助手段对金针菇菌丝体组织进行处理，同时以纤维素酶、果胶酶及蛋白酶组成的复合酶对金针菇菌丝体水浸液酶解获得金针菇多糖，提供一种具有比常规方法更佳的提取效果，以较低的成本提取金针菇菌丝体胞内多糖工艺及其确定方法。

本发明的技术方案是：一种提取金针菇菌丝体胞内多糖的工艺组合，料液比按质量比为1∶10-1∶60，复合酶加入量在原料质量的0.5％-5.0％之间，超声波功率范围值为100W-500W之间，酶解时间范围值为40min-100min之间，酶解温度范围值为30℃-60℃之间，酶解pH值范围值为4.0-8.0之间。

所述的一种提取金针菇菌丝体胞内多糖的工艺组合的确定方法是：

1)选定优质的金针菇菌丝体深层发酵所得的菌丝体干粉

2)确定料液比

将步骤1)选定的菌丝体干粉充分溶入水中，金针菇菌丝体合理料液比在1∶10(g∶g)-1∶60(g∶g)之间。在该料液比条件下，进行热水浸提多糖实验，控制浸提温度为50～95℃、浸提pH值4.0～7.5、浸提时间40min～120min范围内。浸提液蒸发浓缩5～15倍后，加入4倍体积的95％乙醇沉淀，2000rmp离心后去除上清液，真空干燥至恒重，称量。通过比较，确定热水浸提获得的金针菇菌丝体胞内多糖提取率最高的料液比，就是本品种的最佳料液比。

3)确定复合酶的添加量