[发明专利]杂交瘤细胞株及其产生抗广州管圆线虫V期幼虫55KD抗原单克隆抗体

说明书

技术领域

本发明涉及一种可产生抗广州管圆线虫V期幼虫55KD抗原单克 隆抗体的杂交瘤细胞及其产生的抗广州管圆线虫V期幼虫55KD抗原 单克隆抗体的方法。

背景技术

广州管圆线虫病(Angiostrongyliasis cantonensis)是指由广 州管圆线虫幼虫在人体内移行，侵入中枢神经系统引起的以急性剧烈 头痛为主要表现的嗜酸性粒细胞增多性脑膜炎或脑膜脑炎 (Eosinophilicmeningitis or Meningoencephalitis，EM)。至1945 年台湾报道的第一例病例以来，该病陆续在我国大陆报道并呈逐年上 升趋势，随后分别在温州、福建出现集体小范围暴发流行，发病率达 到44.8％。2003年广州管圆线虫病被卫生部列为新发传染病，但未引 起足够的重视，缺乏对该病系统的认识、高效的检测手段和规范的诊 疗措施。2006年6月北京的局部暴发流行，发病人数之多、涉及范 围之广，给大众敲响了警钟，引起了社会各界人士的普遍关注。随着 人们饮食习惯改变，广州管圆线虫病逐年攀升，已对我国公共卫生和 人民健康造成严重的威胁，使我国政府部门和医疗机构承受巨大的经 济损失与社会舆论压力。

广州管圆线虫病的误诊率高，目前主要靠从病人脑脊液中检测到幼龄 成虫的虫体来确诊。由于该病的临床症状与许多中枢神经紊乱性疾病 很相似，且广州管圆线虫病病原学确诊率又较低(＜10％)，给临床诊 断带来很大困难。所以免疫学方法作为辅助诊断手段在广州管圆线虫 病的诊断上具有重要价值。但国内至今对该病的诊断还停留在抗体检 测阶段，因存在下列问题：①感染后抗体的出现较晚，②完全治愈后 抗体仍会在体内存在较长时间，无法进行现症感染诊断和疗效考核， ③同其它蠕虫感染有较高的交叉反应等，限制了这些免疫诊断方法的 可靠性。

发明内容

本发明的目的在于为克服现有早期诊断广州管圆线虫病技术的不 足而提供一种杂交瘤细胞株及其产生抗广州管圆线虫V期幼虫55 KD抗原单克隆抗体。

为实现上述目的，本发明所提供的可产生抗广州管圆线虫V期幼 虫55KD抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株，名称为 ACV1(Angiostrongylus cantonensis V stage larva 1，)。该细胞株已于2009 年4月29日保存于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC- C200930。

杂交瘤细胞株ACV1产生抗广州管圆线虫V期幼虫55KD抗原的单 克隆抗体制备方法包括以下步骤：

(1)电渗法分离广州管圆线虫V期幼虫55KD蛋白；

(2)以从步骤(1)分离得到的蛋白作为免疫原免疫动物；

(3)取免疫动物脾细胞，将其与骨髓瘤细胞融合，得到杂交瘤细 胞；

(4)从细胞培养液或接种杂交瘤细胞的动物腹水液中分离并纯化 所需单克隆抗体。

杂交瘤细胞株ACV1可产生抗广州管圆线虫V期幼虫55KD抗原的 单克隆抗体，此抗体可与广州管圆线虫V期幼虫55KD抗原具有较高 的结合特异性及亲和力，将此单克隆抗体应用于广州管圆线虫循环抗 原水平的检测，提供了早期诊断广州管圆线虫病的方法。

由上述杂交瘤细胞ACV1产生的抗广州管圆线虫V期幼虫55KD抗 原单克隆抗体命名为ACV McAb。

下面结合具体实施例对本发明作进一步详细说明。

附图说明

图1为杂交瘤细胞的染色体核型观察结果。

图2为经纯化的杂交瘤细胞ACV1产生的单克隆抗体的SDS-PAGE 检测结果。

图3为纯化的单克隆抗体与广州管圆线虫V期幼虫抗原的结合特 异性的Western Blot检测结果。

具体实施方式

下述实施例中所用方法如无特别说明均为常规方法。

杂交瘤细胞株ACV1及其产生的抗广州管圆线虫V期幼虫55KD 抗原单克隆抗体的获得