[发明专利]大麦成熟胚愈伤组织诱导法及所用的诱导培养基

说明书

技术领域

本发明属于植物组织培养领域，具体的说，本发明涉及大麦成熟胚初代愈伤组织的诱导方法和相应的诱导体系。

背景技术

大麦成熟胚系种子的一部分，易于操作，且取材不受季节限制，数量容易保证。这样，以成熟胚为外植体来建立高效的再生体系受到广泛重视。早在1979年，Bayliss和Dunn(1979，Plant Sci Lett 14：311-316)从大麦成熟胚成功地诱导出愈伤组织；之后，Rengel(1987，Plant Physi Bilchem 25：43-48)首次报道从大麦成熟胚诱导的愈伤组织中实现了植株再生，但再生频率很低。成熟胚诱导的初代愈伤组织是水质、柔软的非胚性愈伤组织，只有通过继代才出现一定频率(20％～30％)的乳黄色或白色、质地致密、表面上具有颗粒感的胚性愈伤组织(严华军，1996，作物学报22：59-65)。另外，Taniguchi(1991，JapBreed 41：571-579)曾对203个大麦基因型的成熟胚进行愈伤组织诱导，结果是14个品种能分化出绿芽，表明大麦成熟胚愈伤组织的再生能力具有较强的品种特异性。大麦成熟胚愈伤组织胚胎发生频率低、再生能力弱、基因型依赖性强，使得建立初代愈伤组织高效诱导体系成为必要。

迄今为止，对大麦成熟胚组织培养技术也已有一些研究，曾有人分析过培养基成分、激素、种壳、诱导方式等因素对大麦成熟胚培养的影响，并比较了部分基因型之间的差异。但总体上，大麦成熟胚培养的高效体系尚未建成，特别是对如何广谱、简便、大量、低污染获得优质初代愈伤组织尚缺乏研究。大麦颖果被稃壳紧密包被，成熟胚体积小且脆弱，这对外植体的有效剥离带来挑战；腹沟部分难以完整去壳，表面消毒效果差，诱导过程中极易造成霉菌污染；浓硫酸去壳虽简便高效，但是对成熟胚会造成较大损伤，诱导时加剧外植体发芽，显著降低出愈率。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种诱导培养基及其制备方法以及一种大麦成熟胚愈伤组织的诱导法，用于诱导获得大麦成熟胚的愈伤组织。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种诱导培养基，其由培养液、2，4-二氯苯氧乙酸和琼脂组成；

所述培养液由以下含量的组分组成：

MnSO₄·4H₂O    22.3mg/L，  KNO₃          2800mg/L，

ZnSO₄·7H₂O    8.6mg/L，   (NH₄)₂SO₄     460mg/L，

H₃BO₃          6.2mg/L，   KH₂PO₄        400mg/L，

Na₂MoO₄·2H₂O  0.25mg/L，  MgSO₄·7H₂O   185mg/L，

CuSO₄·5H₂O    0.025mg/L， CaCl₂·2H₂O   165mg/L，

CoCl₂·6H₂O    0.025mg/L， 维生素B₁      0.1mg/L，

KI             0.83mg/L，  维生素B₆      0.5mg/L，

Na₂-EDTA·2H₂O 37.3mg/L，  甘氨酸        2mg/L，

FeSO₄·7H₂O    27.8mg/L，  烟酸          0.5mg/L，

脯氨酸         0.5g/L，    水解酪蛋白    0.5g/L，

肌醇           0.1g/L，    麦芽糖        60g/L，

其余为蒸馏水；

2，4-二氯苯氧乙酸∶培养液＝6mg/L；琼脂∶培养液＝0.55％的重量比。

本发明还同时提供了上述诱导培养基的制备方法，依次进行以下步骤：

1)、配制培养液：