[发明专利]卷烟烟气致细胞毒性的测定评价方法

权利要求书

1.卷烟烟气致细胞毒性的测定评价方法，其特征在于该方法包括以下的步骤：①卷烟样品 采用吸烟机抽吸卷烟，连续抽吸多支卷烟后将剑桥滤片取出，置于DMSO溶液中，振荡均 匀制成卷烟烟气粒相物提取液；

②采用HMy2.CIR人B淋巴母细胞系，用含胎牛血清的IMDM培养液于细胞培养箱中培养， 2～3天传代一次；

③于微孔板中每孔接种2×10⁴～5×10⁴个B淋巴细胞，各受试物分别采用0.001～0.015 支烟/ml浓度区间内选择多个浓度的卷烟烟气粒相物提取液进行染毒；

④染毒结束后向每孔中加入适量的CCK-8，置培养箱中显色；

⑤显色结束后用酶标仪测定吸光度，按照以下公式计算细胞存活率：

细胞存活率(％)＝[(A_s-A_b)/(A_c-A_b)]×100％，其中

A_s为含处理细胞的培养基

A_c为含未处理细胞的培养基

A_b不含细胞的培养基；

⑥然后绘制成图，细胞存活率为50％的受试物浓度值即为IC₅₀。

2.根据权利要求1所述的卷烟烟气致细胞毒性的测定评价方法，其特征在于各受试物分 别采用2.5×10^-3、5.0×10^-3、7.5×10^-3、10.0×10^-3和12.5×10^-3支烟/ml浓度的卷烟烟气 粒相物提取液进行染毒。

3.根据权利要求1所述的卷烟烟气致细胞毒性的测定评价方法，其特征在于：CCK-8的加 入量为5～15μL。

4.根据权利要求1所述的卷烟烟气致细胞毒性的测定评价方法，其特征在于：其特征在于 步骤①卷烟烟气粒相物提取液的制备方法如下：卷烟样品于温度22℃土1℃和相对湿度 60％士2％下平衡48h，然后在温度为22℃土2℃，湿度为60％士5％恒温恒湿下用SM400 吸烟机抽吸卷烟，抽吸条件为：每次抽吸容积为35ml，抽吸2s，间隔60s；连续抽吸5 支卷烟后将剑桥滤片取出，置10mlDMSO溶液中，以145转/分钟振荡30分钟，分装后 置-70℃冰箱中待用。