[发明专利]一种耐冷红掌的转基因培育方法

权利要求书

1.一种耐冷红掌的转基因培育方法，其特征在于包括以下步骤：

1)取主栽红掌品种的顶芽为外植体，接种至诱导培养基，诱导愈伤组织；

2)取诱导形成2周的愈伤组织，转移至继代培养基，继代培养至愈伤组织进入快速增殖期；

3)取快速增殖的愈伤组织，在25℃黑暗条件下进行受体愈伤组织预培养3天；

4)取预培养的愈伤组织，在农杆菌悬浮液中浸泡15分钟，之后弃去菌液，用无菌滤纸吸干，接种于共培养基上，在23℃黑暗条件下共培养3天；

5)取共培养愈伤组织，洗净、晾干后，转移到筛选培养基，在25℃黑暗条件下培养4周，收集新长出的抗性愈伤组织，转移至新的筛选培养基上，再进行连续3轮继代筛选，每隔4周转继1次；

6)取4轮筛选后的抗性愈伤组织，转移至分化培养基，诱导分化成苗，对抗性植株进行葡糖苷酸酶基因组织化学染色和分子检测，选取含目的基因的分化小苗，转移至生根培养基长成幼苗；

7)取入选的转基因植株，转移至温度0℃下进行耐冷性鉴定4周，选留不受冻冻危害的转基因植株；

8)继续种植步骤7)筛选的转基因红掌株系，室内外评价验证耐冷的表达稳定性，对稳定的优良株系进行繁殖，培育出转基因耐冷红掌。

2.根据权利要求1所述的耐冷红掌的转基因培育方法，其特征在于所说的诱导培养基为1/2MS基本培养基添加2，4-D 0.6mg、6-BA 0.5mg、蔗糖30g、琼脂粉6.8g，pH灭菌前5.8。

3.根据权利要求1所述的耐冷红掌的转基因培育方法，其特征在于所说的继代培养基为MS基本培养基添加2，4-D 0.6mg、6-BA 2mg、蔗糖30g、琼脂粉6.8g，pH灭菌前5.8。

4.根据权利要求1所述的耐冷红掌的转基因培育方法，其特征在于所说的共培养基为1/2MS基本培养基添加ABA 5mg/L、2，4-D 0.6mg、6-BA 2mg、蔗糖30g、琼脂粉6.8g，pH灭菌前5.8。

5.根据权利要求1所述的耐冷红掌的转基因培育方法，其特征在于所说的筛选培养基为1/2MS基本培养基添加潮霉素100mg、ABA 5mg/L、2，4-D 0.6mg、6-BA 2mg、蔗糖30g、琼脂粉6.8g，pH灭菌前5.8。

6.根据权利要求1所述的耐冷红掌的转基因培育方法，其特征在于所说的分化培养基为MS基本培养基添加KT 1mg、NAA 0.2mg、蔗糖30g、琼脂粉6.8g，pH灭菌前5.8。

7.根据权利要求1所述的耐冷红掌的转基因培育方法，其特征在于所说的生根培养基为MS基本培养基添加NAA 0.5mg、蔗糖30g、琼脂粉6.8g，pH灭菌前5.8。

8.根据权利要求2-7中任一所述的耐冷红掌的转基因培育方法，其特征在于所说的MS基本培养基为NH₄NO₃650mg、KNO₃900mg、CaCl₂·2H₂O 440mg、MgSO₄·7H₂O 370mg、KH₂PO₄700mg、KI 0.83mg、H₃BO₃6.2mg、MnSO₄·4H₂O22.3mg、ZnSO₄·7H₂O 8.6mg、Na₂MnO₄·2H2O 0.25mg、CuSO₄·5H₂O 0.025mg、CoCl₂·6H₂O 0.025mg、FeSO₄·7H₂O 27.8mg Na₂-EDTA·2H₂O 37.3mg、肌醇100mg、烟酸0.5mg、维生素B60.5mg、维生素B 10.5mg和甘氨酸2mg。