[发明专利]毛竹微卫星分子标记的开发与应用

权利要求书

1，一种毛竹微卫星分子标记的开发方法，其特征包括如下步骤：

(1)毛竹DNA序列的获得：用毛竹的拉丁文学名作为关键词，在美国国立卫生研究院维护的基因序列数据库中检索并下载获得；

(2)含有微卫星DNA序列的筛选：用单机版微卫星分析程序和在线微卫星位点分析软件，对下载的序列进行筛选，获得含有微卫星位点的毛竹DNA序列；

(3)引物设计和微卫星位点验证：

①引物设计：用引物设计软件设计扩增含有微卫星位点的DNA聚合酶链式反应引物，引物含有碱基数控制在18-22个，两引物退火温度差＜4℃，扩增的DNA片段在350个碱基以内；

②微卫星验证：利用上述引物进行DNA聚合酶链式反应扩增、扩增产物的电泳分离、银染检测、微卫星位点的再扩增、亚克隆和测序确认工作，最后得到19对毛竹微卫星标记引物，其退火温度在46℃-59℃。

2，用权利要求1所述的毛竹微卫星分子标记的开发方法，其特征是获得19对毛竹微卫星标记的引物分别是：

PBM002：5’-ATGGAGCATTCATTTGAG-3’    5’-TTGACAAGTTTGGAGGGT-3’

PBM004：5’-CGATGAAGTTGCCTGTGG-3’    5’-TCAAGTCGCATTGGAGTA-3’

PBM007：5’-CTCGAGGTGAAGTTACATTA-3’  5’-TCGTAGAGCACTATCCATTT-3’

PBM011：5’-TAAAGAAGTATAATGTATTCG-3’ 5’-AGCTGTTTTAGCATCTATGTT-3’

PBM013：5’-TTTTACTAACGTGCCCGTATT-3’ 5’-GGAGGATCGCTGGATTGG-3’

PBM014：5’-GCCGTCCAAACGCTCCTT-3’    5’-CACCCATCCATCTTATGCTAT-3’

PBM016：5’-CCCACAGAAGGTCGCACTA-3’   5’-CCGCCGAGAACGTCTACAT-3’

PBM017：5’-TATGCCTCCAATAATCCG-3’    5’-AAGGCGTAGCCACCGAAT-3’

PBM018：5’-GACGACGAGTGTAACGCTGAG-3’ 5’-AGGATGATGCCGGTGAGG-3’

PBM019：5’-TCCTAGCCCTACCCTGTCC-3’   5’-CACGGTGCTCGCTTAAATAG-3’

PBM020：5’-TCGCATCTAAACAACATC-3’    5’-GAGAAGAAGAAAGGAGGA-3’

PBM021：5’-AGGGTGTTATTTGCTATTGT-3’  5’-AAATCCGACGCTGGAGGC-3’

PBM022：5’-AAAGATGTTGCCTTGTTC-3’    5’-GTGCATGTCTATTCCCTC-3’

PBM023：5’-TTTCATGGAGGGCGACAG-3’   5’-GCCGACCAGGAAACAAACGAA-3’

PBM025：5’-GTTGTGCCCAGCACTTTA-3’   5’-TGACGCCACTCATTTCTT-3’

PBM026：5’-CTATCATCAAATGTGCCTCAA-3’5’-CCGAGCCTCACTTTCTGC-3’

PBM027：5’-AAAGCAACCACGCCATTA-3’   5’-TCGGAGGAGAAGGAGAAG-3’

PBM028：5’-CAGGTAGTCGTCTTATCGAGT-3’5’-ATAAGTCAATTTCGAATGAA-3’

PBM030：5’-GTTGCCCGTGGTTACTGT-3’   5’-CGTGAGCCATCTGAGTTT-3’