[发明专利]一株高产孢环链拟青霉菌株及其筛选与应用方法

说明书

技术领域

本发明涉及微生物，具体而言，涉及环链拟青霉菌株孢子形成或分离的方法，还涉及其应用方法。

背景技术

近年来，利用昆虫病原真菌来防治农作物的虫害技术得到较快的发展，在中国专利申请件中，就有200710031511.X号“一种玫烟色拟青霉菌菌株及其应用”、200710059835.4号“防治线虫危害的生物有机肥制备方法及用途”、200710117818.1号“一株淡紫拟青霉菌与应用”、200810029158.6号“一种爪哇拟青霉菌株及其应用”、200810220004.5号“绿僵菌素与玫烟色拟青霉真菌混配的杀虫剂及其制备方法”等属于采用真菌防治虫害的生物技术。目前生物农药的防治受到人们的关注。

对十字花科蔬菜害虫小菜蛾、蚜虫等的防治，多采用传统的化学防治方法。环链拟青霉Paecilomyces cateniannulatus Z.Q.Liang是一种重要的昆虫病原真菌，可寄生很多鳞翅目类昆虫；在我国的地理分布也较广阔，这种病原真菌对森林害虫的调节具有重要意义。同时作为一种活体生物农药，具有不同于现有化学杀虫剂的全新作用机理、对环境无污染、无残留的特征，可以用来防治菜青虫、蚜虫和小菜蛾等害虫，在温室害虫的生物防治上有很好的应用前景。开发这类生物杀虫剂意义重大。

发明内容

本发明的目的是[1]提供一种环链拟青霉菌菌株；[2]为生产上述所需高产孢、高致病力环链拟青霉菌菌株提供一种简便的筛选方法；[3]提供上述环链拟青霉菌菌株的应用方法。

本发明提供的环链拟青霉菌菌株是从云南省昆明市西山公园的罹病昆虫上分离获得；该菌株为Paecilomyces cateniannulatus GZUIFR-XS.1，菌株保藏号为：CCTCC No：M209120，2009年6月8日在中国典型培养物保藏中心保藏。所述的环链拟青霉Paecilomyces cateniannulatus Z.Q.Liang菌株GZUIFR-XS.1，属丝孢目、拟青霉属。

所述环链拟青霉在查氏培养基上，25℃下培养14天，菌落白色，隆起，长绒毛状，延长培养产生密集型孢梗束；背面白色；分生孢子梗短，长约10～15μm，其上着生有由2～4个瓶梗组成的轮生体，瓶梗基部椭圆形或柱状膨大，向上突然变细，7～11×1.3～3μm，颈部长约2μm。分生孢子透明，光滑，椭圆形，近球形或柱状，2～5×1.3～2μm，形成叠瓦状排列的斜链或成环状。

本发明提供的筛选方法是将环链拟青霉菌株接种于PDA培养基上，26C下恒温培养14d，用灭菌的打孔器切取带菌的琼脂片，并将其置于装有玻璃珠的30mL 0.1％吐温-80的无菌水中，振荡30min，待分生孢子完全被打散均匀后，用无菌脱脂纱布过滤，获得孢子悬浮液。

本发明提供的应用方法是将上述环链拟青霉菌孢子悬浮液用喷雾法或浸液法喷洒于十字花科蔬菜上，用于菜青虫、小菜蛾、蚜虫等害虫的生物防治。所述菌株的菌落产生密集型孢梗束，其菌株由于产孢量大、致病力高，是一种有效的杀虫剂。

本发明与现有技术相比，具有如下优点和有益效果：本菌株从云南省昆明市西山公园的罹病虫体上获得，为中国本土的菌株，并非从国外引进，能适应本地的自然环境。该环链拟青霉菌是一种昆虫病原真菌，作为一种活体生物农药，具有不同于现有化学杀虫剂的全新作用机理、对环境无污染、无残留，可以用作防治菜青虫、蚜虫和小菜蛾等害虫，在温室害虫的生物防治上有很好的应用前景。该环链拟青霉产孢量大、致病力强，其菌落产生肉眼可见的密集型孢梗束，这为生产菌株的选择提供了一种简便的筛选方法。

附图说明

图1为菌株的形态示意图，图2为表面孢梗束密集型菌落，图3为表面孢梗束稀疏型菌落，图4为粉质型菌落，图5为致病力测定结果图。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述。

实施例1  菌株的分离鉴定

1.实验材料与方法

1.1材料来源

在云南省昆明市西山公园、贵州省贵阳市森林公园、贵州省遵义凤凰山、辽宁沈阳的罹病昆虫上以及北京的土壤。

马丁氏培养基：KH₂PO4 1g，MgSO₄.7H₂O 0.5g，蛋白胨5g，葡萄糖10g，琼脂18g，孟加拉红1/300ml。灭菌条件：121℃，30min。用前待温度冷却在40℃左右，加青霉素20/mg，链霉素40μg/mg。