[发明专利]人胚肺成纤维细胞乙型脑炎疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物工程领域，具体地是涉及由人胚肺成纤维细胞制 备的乙型脑炎灭活疫苗和减毒活疫苗，及其制备工艺。

背景技术

乙型脑炎是一种由中枢神经系统急性病毒感染导致的传染性疾 病，简称乙脑，由乙脑病毒引起，其发病年龄以10岁以下儿童为主。 乙脑传染源是被感染的人或动物，再通过蚊虫的叮咬进而传播给其他 人或动物，猪与蚊被认为是该病毒的主要长期储存宿主和扩散宿主。 乙脑在流行地区年发病率高达10～100/10万，近30亿人口生活在乙 型脑炎流行区，主要包括东南亚及西太平洋地区，此地区每年新生儿 超过7000万。乙脑在亚洲每年至少引起50000临床病例和10000例 病死，约85％病例发生在15岁以下儿童，10岁以下儿童易产生严重 后遗症，如：失语、瘫痪、精神异常、痴呆、肢体弯曲畸形、扭转痉 挛等。最近几十年中，乙型脑炎的数起暴发流行越来越向曾经是非流 行的地区扩大，同时伴随很高的病死率和严重的持久性神经系统后遗 症，因而在亚洲很多国家和地区，乙脑成为严重的公共健康问题。中 国乙型脑炎的流行具有明显的季节性特点，多发于夏、秋季节，90％ 病例发生于7、8、9三个月。

流行性乙型脑炎病毒(Japanese B Encephalitis Virus，JEV)简称 乙脑病毒，属黄病毒科黄病毒属。病毒颗粒呈二十面体对称结构，直 径45-50nm，病毒颗粒由核心、包膜和刺突组成。基因为正链单股 RNA，RNA包被于多肽的衣壳C中，组成病毒颗粒的核心。其包膜 中有糖基化蛋白E和非糖基化蛋白prM/M。

目前还没有治疗乙型脑炎的特效药物，从环境方面控制其传播的 效果不理想。乙型脑炎疫苗的免疫接种是控制乙型脑炎疾病最为经济 有效地措施。预防乙型脑炎对于保护儿童健康更是显得极为重要。我 国规定15岁以下未成年人可免费接种乙脑疫苗，接种乙脑疫苗后， 人群的保护率可达90％以上。

由于乙型脑炎疫苗基础免疫始于6月龄的健康婴幼儿，对疫苗的 首要要求就是要保证疫苗有足够的安全性。目前世界上应用较多的主 要有三种乙脑疫苗，第一种是以日本为代表的用感染乙脑病毒的小白 鼠脑组织制备的纯化乙脑灭活疫苗以及中国生产的原代地鼠肾细胞 培养的乙脑灭活疫苗，这类灭活疫苗免疫原性弱，需多次接种，造成 疫苗中残存的动物组织外源物质不可避免地带入人体，是多见过敏反 应的重要原因，例如，经鼠脑组织培养的灭活疫苗以疼痛、发红、肿 胀的局部副反应约为20％，包括头疼、发热、肌痛、不适和胃肠道症 状的全身性反应为10～30％，而由原代地鼠肾细胞培养的灭活疫苗超 过38℃的发热高达12％，在减少牛血清残留量后，超过38℃的发热 减至6％；第二种是原代地鼠肾乙脑减毒疫苗，疫苗的细胞基质也来 源于普通级动物，无法保证不携带外源因子。减毒活疫苗虽然可以减 少多次接种引发的过敏反应，但有报道称减毒疫苗病毒在有免疫功能 障碍的动物体内可增殖，并引起死亡，在接种免疫功能障碍者时，有 可能造成安全性问题。其次，活疫苗因存在诸多问题而尚未得到WHO 的认可，因其有可能导致严重的潜在病毒污染问题；第三种是北京生 物制品研究所以Vero细胞为培养基质生产的冻干乙脑纯化灭活疫苗， 这种疫苗已在中国境内投入使用，虽避免了上述疫苗缺陷，在安全性 上有显著提高，但Vero细胞超过232代次后在裸鼠体内有致瘤现象， 因此，美国FDA要求用Vero细胞生产的疫苗，生产过程中要有去除 细胞的工艺，必须要保证成品中无残余细胞成分。

现正在开发研究的新型乙脑疫苗有美国和韩国合作的狗肾减毒 活疫苗，这种疫苗仍使用动物细胞系，也不能避免带入动物组织外源 物质，仍存在安全性问题。