[发明专利]具有促进成纤维细胞生长因子受体3活性的多肽及其筛选方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种多肽，特别涉及一种具有促进成纤维细胞生长因子受体3 活性的多肽，还涉及该多肽的筛选方法和应用。

背景技术

成纤维细胞生长因子受体(fibroblast growth f actor receptors，FGFRs)是一 类具有自身磷酸化活性的跨膜酪氨酸激酶受体，与其相应配体成纤维细胞生长 因子(fibroblast growth factors，FGFs)结合，在组织器官发育及损伤修复过程 中发挥重要作用。

目前已发现4种FGFRs，即FGFR1、FGFR2、FGFR3和FGFR4。其中，FGFR3 介导软骨内骨化的负性调节分子，在骨骼发育中具有重要作用。既往研究显示， FGFR3功能获得型基因突变导致骨骺生长板中软骨细胞的增殖和分化受到抑 制，引起多种骨骼发育缺陷性遗传疾病，如软骨发育不全(ACH)、季肋发育不 全(HCH)和致死性骨发育不全(TD)等；而FGFR3功能缺失型基因突变导致 骨骺生长板闭合延迟、肥大软骨区增宽和长骨过度生长等。近年来研究发现， FGFR3在骨性关节炎、骨质疏松、骨折等骨骼疾病的发生、发展中也具有重要 作用，促进FGFR3活性可以防治骨性关节炎、骨质疏松和骨折等骨骼疾病。

目前虽已发现23种FGFs，但至今未见仅与FGFR3特异性结合的FGFs。因多 肽具有分子量小、空间结构简单、免疫原性低等优点，故开发能与FGFR3特异 性结合并促进其活性的多肽有着良好的应用前景，有望开发成为抗FGFR3功能 低下性疾病的药物。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种具有促进FGFR3活性的多肽； 目的之二在于提供所述具有促进FGFR3活性的多肽的筛选方法；目的之三在于 提供所述具有促进FGFR3活性的多肽的应用。

为达到上述目的，在本发明的第一方面，提供了一种具有促进FGFR3活性 的多肽，由Val-Ser-Pro-Pro-Leu-Thr-Leu-Gly-Gln-Leu-Leu-Ser所示的氨基酸序列 组成。

在本发明的第二方面，提供了所述具有促进FGFR3活性的多肽的筛选方法， 包括以下步骤：

a、噬菌体12肽库的生物淘选

将噬菌体12肽库与包被有FGFR3的酶标板共孵育，用TBST洗去非特异 性结合的噬菌体，再用甘氨酸-盐酸缓冲液洗脱特异性结合的噬菌体，用Tris-HCl 缓冲液中和洗脱液，得特异性结合的噬菌体，测定滴度；在宿主菌ER2738中扩 增特异性结合的噬菌体，测定滴度，作为下一轮淘选的投入噬菌体；重复上述 步骤共进行三轮淘选，富集能与FGFR3特异性结合的噬菌体；

b、噬菌体的DNA提取和测序

从第三轮淘选出的噬菌体的滴度测定平板上随机挑取噬菌体单克隆，在宿 主菌ER2738中扩增后，提取DNA进行测序，根据所测得的DNA序列推导出 噬菌体上展示的外源多肽的氨基酸序列；

c、多肽的合成

根据所得外源多肽的氨基酸序列，人工合成多肽；

d、多肽的促FGFR3活性检测

检测多肽对FGFR3活性的促进作用，即得具有促进FGFR3活性的多肽。