[发明专利]一种细胞培养载体制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种细胞培养载体制备方法，具体指利用纳米级丝素蛋白颗粒(或片断)和聚乙烯醇制备细胞培养载体的方法，本方法制备的细胞培养载体用于培养靶细胞，其培养出来的靶细胞可用于基因表达，制备基因药物，该细胞培养载体也可用于组织工程支架，属于生物材料、生化工程与细胞工程领域。

背景技术

丝素蛋白可以以多种形式(如薄膜、膜、网状结构、海绵状等)在体外支持细胞的黏附、增殖和分化，体内促进组织的修复，尤其是三维的丝素蛋白支架扩大了丝素在细胞组织工程中的应用，成为组织工程中最有前景的生物材料之一。

基因药物的制造方法是将目的基因用DNA重组的方法连接在载体上，然后将载体导入靶细胞，使目的基因在靶细胞中得到表达，最后将表达的目的蛋白质提纯及做成制剂，从而成为蛋白类药或疫苗。在这个生产过程中，靶细胞是必不可少的而且是基因药物生产中药物成本的主要决定因素，需求量极大。靶细胞可以是微生物、哺乳动物细胞或人体组织靶细胞。如哺乳动物细胞的中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)被较多的应用在基因药物制备上。现有的体外培养细胞的类型有贴附型细胞和悬浮型细胞，其培养方法主要有原代培养、传代培养、悬浮培养和其他如微载体、微囊、中空纤维法等，而采用的细胞基质材料多为合成高分子材料，其生物相容性较差，且合成高分子材料也可能出现残留单体而带有一定毒性。同时其具有表面疏水性或表面粗糙等问题，其培养的细胞密度也较低、收量少，如果采用再次表面改性提高表面亲水性能，其成本又较高等缺点。基于细胞无菌性培养的要求，廉价的一次性培养载体的实现，也将为降低基因药物的成本、优化培养载体而作出贡献。

发明内容

针对现有技术存在的上述不足，本发明的目的是提供一种细胞培养载体制备方法，本制备方法易工业应用，得到的细胞培养载体培养出的细胞具有密度大、收量大、低成本的特点。

本发明的目的是这样实现的：一种细胞培养载体制备方法，制备步骤为：

(1)首先制备得到纳米级丝素蛋白粉末；

(2)将纳米级丝素蛋白粉末分散或溶解于水溶液中，与聚乙烯醇水溶液实现共混，共混纳米级丝素蛋白与聚乙烯醇质量比为1∶1～9，均匀共混后浓缩，使纳米级丝素蛋白与聚乙烯醇总质量的浓度在5％到10％之间，再将共混液成型为纤维或膜片；

(3)最后将第(2)步得到的纤维或膜片做成所需的立体形状，即成为细胞培养载体。

本制备方法是采用纳米级丝素蛋白颗粒(或片断)分散或溶解于纯水中，再与聚乙烯醇水溶液共混，使纳米级丝素蛋白颗粒(或片断)超微细镶嵌于聚乙烯醇薄膜中而制成。方法简便易行，制备成本低，可工业化生产。用本制备方法所获得细胞培养载体产品，具备高科技、低成本、高质量，在国内医药领域具有竞争力。本制备方法所获得产品，构筑了细胞培养的一个拟生态的培养体系，模拟细胞外间质，呈立体网状结构，孔道多且分布均匀，孔道之间相互连贯，没有“盲区”，以加强细胞与细胞间的″生理性″接触，使细胞在整个培养过程中充分暴露于培养液中，并朝各个方向生长从而增大细胞生长密度。由于其呈网状构造，还可防止细胞间堆积成块而影响其分裂生长。该制品(1)、可用于基因工程单抗药物生产；(2)、可针对基因工程的真核细胞进行培养；(3)、结合其降解性能，可用于组织工程支架。由于细胞无菌培养的要求，此细胞培养载体可以是一种一次性使用品，包括所有的生物制药企业、医疗机构、研究机关在内的市场需求较大，作为一种高科技产品，将会带来很大的经济效益。

具体实施方式

下面对本发明作进一步的说明。

本发明的细胞培养载体制备方法，其制备步骤为，

(1)首先从茧丝、茧壳(可用废弃物料)中经过脱蜡质、脱碳水化合物、脱丝胶制成纯净丝素纤维，并由50～60％NaSCN溶液溶解透析，再使用α-糜蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶进行酶解得纳米级丝素溶液，冷冻干燥得纳米级丝素蛋白粉末；由于纳米级丝素蛋白粉末的制备为现有技术，在此不赘述，详细方法可参见申请人在此之前申请的名称为“一种纳米蚕丝丝素蛋白粉的制备方法”、申请号为“200710092969.6”的发明专利。