[发明专利]一种纯化艾塞那肽的方法

说明书

技术领域

本发明属于HPLC技术领域，尤其是涉及一种规模化纯化艾塞那肽 (Exenatide)的方法。

背景技术

糖尿病是由多种病因引起的以慢性高血糖为特征的代谢紊乱，高血糖主要 由胰岛素分泌或作用的缺陷引起。糖尿病可分两种，胰岛素依赖型糖尿病(I 型糖尿病)和非胰岛素依赖型糖尿病(II型糖尿病)，其中II型糖尿病患者占90％ 以上。WHO统计结果显示，目前全球已经诊断的II型糖尿病达到1.3亿人，我 国已超过4000万人，是继印度之后的第二大糖尿病大国。

常用的II型糖尿病治疗药物包括：双胍类、磺脲类、α-葡萄糖甘酶抑制剂、 噻唑烷二酮类及胰岛素等。但研究发现，这几类常用药物都有可能造成身体的 不良反应，特别是二甲双胍，有导致患者乳酸性酸中毒的危险性；而胰岛素治 疗也常导致低血糖的发生。因此，迫切需要研制出新的II型糖尿病治疗药物。

1995年，美国专利(US5424286)公开了一种从南美大毒蜥Gilka monster， Heloderma Horridum)的唾液中分离出来的一种含有39个氨基酸的多肽， Exendin-4

(H-His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala- Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-P ro-Ser-NH₂)。其结构与人的胰高血糖素(Glucagon)有48％的同源性，与人的GLP-1 (胰高血糖素样肽-1)有53％的同源性。

研究表明，作为GLP-1的类似物，Exendin-4能够与GLP-1受体作用，通过 刺激胰岛β细胞再生，促进胰岛素分泌，抑制胰高血糖素的释放，减慢胃排空 速率，抑制食物摄入。其促胰岛素分泌作用是根据血糖水平进行的，故可降低 低血糖的发生率，且对其他促胰岛素分泌剂不敏感的II型糖尿病病人仍有降糖 作用，同时GLP-1还可以减轻II型糖尿病患者的体重，是一类全新的糖尿病治 疗药物。

2005年4月，美国礼来公司和Amylin公司共同开发的糖尿病药物倍它 (Byetta，化学名Exenatide(人工合成的Exendin-4))获美国FDA批准上市。 与此同时，国外许多制药公司如诺和诺德制药公司、默克制药公司也在争相研 发与倍它属于同类型的药物。另外，国内外也少有对Exendin-4进行固相直接合 成的相关文献，但还没有文献具体研究Exenatide相关纯化的方法，特别是规模 化纯化Exenatide的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一条适于产业化纯艾塞那肽的工艺方法，使用反相 高效液相色谱法纯化纯艾塞那肽，并用阴离子交换转盐，纯度高且收率好，达 到产业化要求，解决现有技术存在的缺陷。

为实现上述目的，本发明采取如下技术方案：

一种纯化艾塞那肽的方法，包括以下步骤：

1)将固相合成所得粗肽用注射用水溶解，用固定相为四烷基硅烷键合硅胶、 八烷基硅烷键合硅胶或十八烷基硅烷键合硅胶的反相硅胶柱，流动相为磷酸盐 缓冲溶液为A相、色谱纯乙腈为B相，进行梯度洗脱纯化，收集目的峰值的肽 溶液；

3)将纯化后的高纯度肽采用阴离子交换转成醋酸盐。

优选的方案是：所述的步骤1)和步骤3)之间还包括步骤2)将收集目的 峰值的肽溶液减压旋蒸浓缩。

更为优选的方案是：所述A相的磷酸盐缓冲溶液pH为3.0至5.3之间。

更为优选的方案是：所述A相的磷酸盐缓冲溶液pH为3.5至4.3之间。

更为优选的方案是：所述色谱纯乙腈的浓度为10-65％，检测波长为230nm。

更为优选的方案是：所述色谱纯乙腈的浓度为15-55％。

本发明与现有技术相比，具有如下优点和有益效果：

本发明提出的一条适于产业化纯艾塞那肽的工艺方法，使用反相高效液相色 谱法纯化纯艾塞那肽，并用阴离子交换转盐，不仅能得到HPLC纯度大于98.0％ 的精肽，而且能够规模化生产，达到纯度高、收率高、产业化的要求。

具体实施方式

实施例1