[发明专利]一种包被载体及其在检测精子成熟度和无创分离成熟精子方法中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及检测体外精子质量、体外辅助生殖领域，特别是涉及一 种包被载体及其在检测精子成熟度和无创分离成熟精子方法中的应用。

背景技术

透明质酸是卵子和透明带黏液基质的主要成分。精子顶体和胞质膜 中含有透明质酸酶。当精子穿透卵冠丘复合体时，胞质膜中透明质酸酶水 解卵冠丘复合体中的黏液透明质酸，从而穿过黏液；在透明带诱发顶体 反应时精子释放透明质酸酶水解透明质酸，有助于精子穿透透明带完成 受精。在整个过程中，精子与透明质酸结合起到了重要作用。有研究表明 只有成熟的活动精子可以与透明质酸结合，成熟精子遗传物质完整，有 益于成功妊娠和子代健康。

辅助生殖是治疗不孕不育的有效方法，但同时也存在一定的遗传风 险，尤其是采用细胞浆内精子注射(ICSI)技术时，穿入卵细胞的精子 是人为选择的，选择具有一定的随机性，所选精子的成熟度将决定胚胎 的健康状况，不成熟的精子与卵细胞结合后，胚胎会变得不稳定，容易 导致流产、胚胎停止发育以及畸形等严重后果。由于必须保证精子的形 态、结构与活力不受外来破坏，故要选择成熟的精子进行ICSI目前是一 件非常困难的事情。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：提供一种透明质酸或透明质酸盐或透 明质酸衍生物包被载体，并应用于检测精子成熟度和分离成熟精子，结 果准确可靠、操作简单快捷、成本低、安全性能好的；还提供应用这种 包被载体来检测精子成熟度和分离成熟精子的方法。

为解决上述问题，本发明提供一种包被载体，其特征在于：所述包 被载体为被透明质酸或透明质酸盐或透明质酸衍生物包被的载体。

所述包被载体为包被载片或包被容器，或包被的球体或圆柱体或锥 体或立方体或不规则体置于或固定在载片表面或容器内。

所述的包被载体通过如下步骤制备：

a.以乙醇洗涤待包被载体，干燥；

b.透明质酸或透明质酸盐或透明质酸衍生物2～6mg/ml，脱乙 酰壳多糖3～8mg/ml，以0.02～0.10mol/L、pH＝4.0的柠檬 酸或醋酸缓冲液充分溶解，室温搅拌反应2小时；

c.包被于载体；

d.以10～30％丙酮，0.5～3.5％1，2，7，8-二环氧基辛烷，10～25％异 丙醇，余量为蒸馏水组成的洗涤液洗涤3次，烘干即可；

所述包被载体为无毒性材质；所述包被载体为玻璃材质或塑料材质。

本发明的透明质酸或透明质酸盐或透明质酸衍生物包被的载体应用 于检测活力精子成熟度。

本发明还提供一种检测精子成熟度的方法，其特征在于，包括如下 步骤：

A.制备活力精子标本；

B.将活力精子标本加样到透明质酸或透明质酸盐或透明质酸衍生 物包被载体；

C.室温反应5-60分钟，使成熟的活力精子与包被物结合；

D.显微镜下观察活力精子头部被包被物捕获的状况，并计数一定数 量的活动精子和其中与包被物结合的活动精子个数；

E.计算活力精子与透明质酸结合率，公式为：活力精子与透明质酸 结合率＝与包被物结合的活动精子数/活动精子总数×100％。

所述步骤A中标本制备方法为取用液化的新鲜精液，或取用液氮超 低温冻存的解冻精液；

其中，新鲜精液液化方法为：

a.等待新鲜精液在体外自然液化；

若精液在体外60分钟后仍然不能完全自然液化时，则

b.在精液中加入培养液或商品化的精子洗涤液并以吸管反复吹 打，促进精液完全液化；或

c.在精液中加入1mg/ml菠萝蛋白酶等蛋白水解酶，37℃孵育 5～20分钟；

所述步骤B中的载体为包被载片或者是表面置有或固定有包被的球 体或圆柱体或锥体或立方体或不规则体的载片，将活力精子标本加样到 包被的载片后盖上盖玻片；

所述步骤D中，计数的活动精子总数大于或等于200个。