[发明专利]一种细胞核移植方法

权利要求书

1.一种细胞核移植方法，包括以下步骤：

用0.1ug/ml光辉霉素作为去核试剂，处理经体外培养成熟的猪卵母细 胞26小时，或用0.05ug/ml防线菌素作为去核试剂，处理经体外培养成熟 的猪卵母细胞20小时，灭活卵母细胞，使之无法进行RNA转录和合成蛋 白；取出成熟后的卵母细胞-卵丘复合体，用透明质酸酶消化卵丘细胞，形 成裸卵，便于后续克隆操作；将裸卵放在链酶蛋白酶中消化，去除透明带；

用口吸管反复吹打卵母细胞去掉其表面的第一极体即去除极体的遗传 物质，将去掉第一极体的卵母细胞用植物凝集素处理，使之表面粘度增加， 黏合一个供体细胞在细胞融合仪中，在2.0KV/cm的电击作用下使二者融 合；将融合后的胚胎放置在培养液中60分钟，使供体细胞充分融入卵母细 胞中，将融合后的胚胎放在激活液中，以0.85KV/cm的电击进行激活，即 模拟精子入卵时的钙波动；

将重构胚置于含有5ug/ml细胞松弛素与10ug/ml放线菌酮混合的培养 液中处理4小时，抑制染色体排出，保证重构胚倍型； 4小时后，将重构胚放在微穴培养体系中，在胚胎培养液中培养5天。

2.一种细胞核移植方法，包括以下步骤：

用5ug/ml或20ug/ml防线菌素作为去核试剂，处理经体外培养成熟的 猪卵母细胞5小时，灭活卵母细胞，使之无法进行RNA转录和合成蛋白； 取出成熟后的卵母细胞-卵丘复合体，用透明质酸酶消化卵丘细胞，形成裸 卵，便于后续克隆操作；将裸卵放在链酶蛋白酶中消化，去除透明带；

用口吸管反复吹打卵母细胞去掉其表面的第一极体即去除极体的遗传 物质，将去掉第一极体的卵母细胞用植物凝集素处理，使之表面粘度增加， 黏合一个供体细胞在细胞融合仪中，在2.0KV/cm的电击作用下使二者融 合；将融合后的胚胎放置在培养液中60分钟，使供体细胞充分融入卵母细 胞中，将融合后的胚胎放在激活液中，以0.85KV/cm的电击进行激活，即 模拟精子入卵时的钙波动；

将重构胚置于含有5ug/ml细胞松弛素与10ug/ml放线菌酮混合的培养 液中处理4小时，抑制染色体排出，保证重构胚倍型；

4小时后，将重构胚放在微穴培养体系中，在胚胎培养液中培养7天。