[发明专利]可用于多重连接扩增技术的长探针的制备方法

权利要求书

1.用于多重连接扩增技术的长探针的制备方法，包括以下步骤：

1)针对目标核苷酸序列和用于制备长探针的与待检测靶片段无关 的模板核苷酸序列设计一对PCR扩增引物，分别为通用引物和检测引物； 所述检测引物由两段核苷酸序列组成，一段根据目标核苷酸序列设计， 另一段根据与待检测靶片段无关的模板核苷酸序列设计；

2)在通用引物的5’端标记生物素；

3)以所述与待检测靶片段无关的模板核苷酸序列为模板进行PCR 扩增，获得生物素标记的双链核苷酸序列；

4)将所述生物素标记的双链核苷酸序列与亲和素磁珠混合；

5)使生物素标记的双链核苷酸序列变性，解链形成单链；

6)离心，取上清，获得非生物素标记的单链核苷酸序列。

2.根据权利要求1所述的可用于多重连接扩增技术的长探针的制 备方法，其特征在于：步骤4)所述PCR扩增得到的生物素标记的双链 核苷酸序列经过纯化后再与亲和素磁珠混合。

3.根据权利要求1所述的可用于多重连接扩增技术的长探针的制 备方法，其特征在于：所述每1份重量份生物素标记的双链核苷酸序列 与10份重量份的亲和素磁珠混合。

4.根据权利要求1所述的可用于多重连接扩增技术的长探针的制 备方法，其特征在于：步骤5)所述生物素标记的双链核苷酸序列加热 变性或者在碱性条件下变性。

5.根据权利要求1所述的可用于多重连接扩增技术的长探针的制 备方法，其特征在于：所述步骤6)的离心条件为4℃，转速10,000rpm， 离心30sec。