[发明专利]提高DNA回收试剂盒回收效率的震荡洗脱方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种DNA回收试剂盒，尤其是涉及一种在DNA回收试剂盒的操作步骤中增加一个震荡的方法，以提高DNA的回收效率，用于DNA片段的PCR产物回收。

背景技术

国外公司生产的DNA回收试剂盒(如Takara)一般回收效率较高，但价格昂贵，实验步骤比较繁琐，回收每个样品的试剂成本约是国产试剂盒(如博大泰克)的5倍。国产的回收试剂盒价格便宜，操作简便，但回收效率较低，影响后续的实验，如变性梯度凝胶电泳(DGGE)实验、DNA片段测序等。国内有不少学者对提高DNA的回收效率的方法进行了探讨，主要有电泳法([1]蒋安，梁慧，陈旭等.回收琼脂糖凝胶中DNA的简便方法.生物技术通报.2006(2)：102-103)、速冻-快速离心法与凝胶浸泡法([2]王春，陈琳玲，许灿新等.简便快速的PCR产物回收方法.南华大学学报·医学版.2005，33(1)：108-110)、冰冻法([3]彭桂庄，庄东红.琼脂糖凝胶电泳中DNA回收方法的比较.生物学杂志.2006，23(5)：48-50)和挤压回收法([4]薛仁镐，金圣爱，孙世孟等.琼脂糖凝胶中DNA片段的挤压回收法.生物技术.2006，16(3)：50-51)，还有其它快速简便的方法([5]姜勇，刘杰，陈伟明.一种从琼脂糖凝胶上回收DNA的高效、快捷、经济的方法.细胞生物学杂志.2000，22(4)：220-221；[6]王文锋，穆灵敏，王红霞.一种高效·快速回收DNA片断的方法.安徽农业科学.2008，36(28)：12118；[7]朱晓峰，安小平，陈锦辉等.一种简便、高效、经济的从凝胶中回收DNA的方法.生物技术通讯.2006，17(4)：603-604)。

实验室的DNA回收一般使用现成的试剂盒。以博大泰克B型小量DNA片段快速胶回收试剂盒为例，其回收方法的实验步骤为：

(1)制作1％的琼脂糖回收胶，PCR产物上样电泳，切下目的条带放入1.5ml离心管中。

(2)加入550μl溶胶液，55℃溶胶5min，期间摇动2次。

(3)装柱，9000rpm，离心30s，重复1次，去掉废液。

(4)500μl漂洗液漂洗，12000rpm离心30s，重复漂洗一次。倒掉废液后，再于12000rpm离心2min。

(5)往柱子中加入合适的洗脱液(通常30～50μl)，室温下放置1～2min后，12000rpm离心2min。按说明书，为提高回收率，一般分2次加入洗脱液，每次25μl，共50μl。

这样的回收结果往往DNA浓度偏低，经常会出现有些样品达不到后续的实验要求，如进行DGGE实验或送测序，需要重新PCR和胶回收，浪费试剂和时间，影响实验进度。部分勉强能用于后续实验的样品，由于DNA浓度较低，也影响实验效果，如DGGE条带淡且模糊，有些信息因此无法表达，需要重新进行DGGE实验，更加浪费时间和试剂。

发明内容

本发明的目的在于针对现有的DNA回收试剂盒的回收效率较低等不足，提供一种回收效率较高，能满足后续实验需求的提高DNA回收试剂盒回收效率的震荡洗脱方法。

本发明的技术方案是在现有的上述DNA回收试剂盒回收方法基础上对其中的步骤(5)进行改进。

本发明包括以下步骤：

1)制备1％的琼脂糖回收胶，PCR产物上样电泳，切下目的条带放入1.5ml离心管中；

2)加入550μl溶胶液，55℃溶胶5min，期间摇动2次；

3)装柱，9000rpm，离心30s，重复1次，去掉废液；

4)500μl漂洗液漂洗，12000rpm离心30s，重复漂洗一次，倒掉废液后，再于12000rpm离心2min；

5)往柱子中加入1次洗脱液，洗脱液的加入量按回收试剂盒的一次加入量计，静置，将装有柱子的离心管插在震荡器的孔中，以500～1000rpm/min的速度震荡，回收DNA。其回收浓度达到最大，比不震荡的浓度提高约20％。

在步骤5)中，所述静置的时间可为0～5min，最好为1min，震荡的速度最好是800rpm/min，震荡的时间可为0.5～5min，最好是2min。

与现有的回收方法相比，本发明具有以下突出优点：

1)与只加1次30μl的洗脱液不震荡相比，本发明的回收浓度和回收量提高约20％；

2)与加2次共50μl洗脱液不震荡相比，本发明的回收量虽提高较少，约6％，但回收浓度提高约77％；