[发明专利]土壤蛋白质提取及胞内蛋白质的分离方法

权利要求书

1.一种土壤蛋白质提取方法，包括样品前处理、蛋白的提取，其特征是：

样品前处理：称取样品土壤65g于锥形瓶，加入预冷的土壤蛋白质提取缓冲液150ml， 混匀后置4℃，摇床振荡过夜；振荡液用滤纸于布氏漏斗真空抽滤，取抽滤液过D101大孔树 脂，取过柱液过0.22μm微孔滤膜，滤液为胞外蛋白质母液，滤膜上做进一步胞内蛋白质提 取；

土壤蛋白质提取缓冲液配制：0.82g磷酸二氢钾+0.16g磷酸氢二钾，定容至100ml，向 其中加入8ml 0.5M，pH8.0 EDTA；

胞外蛋白质的提取：取胞外蛋白质母液，加入等体积的预冷的丙酮溶液，混匀后静置沉 淀4-5h，30000rpm，4℃离心30min，弃上清，沉淀用预冷的丙酮洗涤，13000rpm，4℃离心 10min，弃上清，沉淀用预冷的无水乙醇于4℃超声波下洗涤10min，13000rpm，4℃离心10min， 弃上清，沉淀用预冷的乙醚洗涤，13000rpm，4℃离心10min，弃上清，沉淀用真空干燥机干 燥，干粉即为胞外土壤蛋白质；

胞内蛋白质的提取：取上述0.22μm微孔滤膜于烧杯中，加入20ml的预冷的土壤蛋白质 提取缓冲液，于超声波仪器4℃超声洗涤10分钟，弃滤膜，溶液倒入50ml离心管中，离心 管于细胞破碎仪中细胞破碎，细胞破碎完成后，向离心管中加入等体积的预冷的丙酮溶液， 混匀后静置沉淀4-5h，30000rpm，4℃离心30min，弃上清，沉淀用预冷的丙酮洗涤，13000rpm， 4℃离心10min，弃上清，沉淀用预冷的无水乙醇于4℃超声波下洗涤10min，13000rpm，4℃ 离心10min，弃上清，沉淀用预冷的乙醚洗涤，13000rpm，4℃离心10min，弃上清，沉淀用 真空干燥机干燥，干粉即为胞内土壤蛋白质沉淀物。