[发明专利]一种检测急性早幼粒细胞白血病PML/RARα融合基因的纳米生物传感器

权利要求书

1.利用纳米生物传感器检测急性早幼粒细胞白血病PML/RARα融合基因。

2.一种检测急性早幼粒细胞白血病PML/RARα融合基因的纳米生物传感器，待检测基因为急性早幼粒细胞白血病(APL)的PML/RARα融合基因，95％的APL病人为t(15；17)(q22；q21)，包括不不同类型纳米材料在不同类型材料电极表面组装构筑纳米修饰电极；以L型融合基因设计捕获探针和信号探针；利用电化学酶联免疫方法，进行急性早幼粒细胞白血病PML/RARα融合基因测定。其特征在于：采用纳米技术、化学键合技术、分子杂交技术、电化学酶联免疫技术相结合制作电化学DNA生物传感器，该传感器包含与待测DNA互补的修饰核酸探针，通过与目标互补DNA进行杂交，再利用电化学分析方法检测酶催化底物产生电信号，从而实现对急性早幼粒细胞白血病PML/RARα融合基因的测定。

3.如权利要求1和2所述检测急性早幼粒细胞白血病PML/RARα融合基因的纳米生物传感器，其特征在于，所述的纳米生物传感器为不同类型纳米材料(Au纳米粒子、碳纳米管等)在不同类型材料电极((金、玻碳、碳糊电极等)表面组装构筑纳米修饰电极。

4.如权利要求1、2和3所述检测急性早幼粒细胞白血病PML/RAR融合基因的纳米生物传感器，其特征在于，所述的待检测APL的PML/RAR融合基因型别，以L型融合基因为例，捕获探针基因采用5′-GGTTGCTGTTGG GCAGGAAGAC-3′，信号探针基因采用5′-GGT CTC AAT GGC TGC CTC CCC G-3′。

5.权利要求1和2所述的酶联免疫法，依序包括如下步骤：(1)利用Au纳米粒子组装技术(电化学沉积、共价键合等)，在电极表面组装Au纳米粒子。采用自组装膜法固定捕获探针，根据带巯基(-SH)的捕获探针在Au纳米粒子修饰电极表面可以形成自组装单分子膜的特性来固定，对Au纳米粒子修饰电极表面未结合的位点通过封闭剂进行封闭，如巯基己醇，巯基乙酸，牛血清白蛋白，酪蛋白等；(2)使长链目标链的一端与5′端标记有生物素(biotin)的信号探针杂交，然后利用长链目标链的另一端与捕获探针通过碱基配对结合实现共杂交，将双链DNA(dsDNA)片段固定化；(3)通过辣根过氧化物酶(HRP)上的亲和素(avidin)，根据亲和素与生物素之间的亲和作用，将酶结合上去，利用酶的信号放大作用，在底物3，3′，5，5′-四甲基联苯胺(TMB)中研究杂交前后电信号的差异。

6.根据权利要求5所述的酶法，其特征在于探针DNA加入后、探针DNA与靶DNA杂交后需采用洗涤剂洗涤除去非特异性吸附，如PBS、0.2％SDS等。

7.如权利要求5所述的酶法，其特征在于采用该法对探针的特异性及灵敏度进行测试，实现对急性早幼粒细胞白血病PML/RARα融合基因的检测。