[发明专利]一种液态深层发酵制备木霉分生孢子的方法和装置

权利要求书

1.液体深层发酵制备木霉分生孢子的装置，其特征在于设有发酵罐、空压机、电磁阀和 时间控制器；

发酵罐设有清除附壁物功能的清壁系统、搅拌器、出料管、无菌空气进气管、无菌空气 排气管、无菌空气分布器、夹套和液位计；清壁系统设有循环泵、循环液管、法兰轴承和清 壁器；清壁器设有液体分布室和至少2个液体喷射器，每个液体喷射器由喷液管和圆锥形的 喷头组成；法兰轴承的内套套在循环液管出口的外部，液体分布室的上端口设有连接法兰， 清壁器固定在法兰轴承上，循环泵用压缩空气管依次与电磁阀和空压机相连，电磁阀与时间 控制器连接，出料管设于发酵罐的底部，无菌空气进气管穿过发酵罐并与无菌空气分布器连 接，无菌空气排气管设于发酵罐的顶部，无菌空气分布器设于搅拌器的下部，夹套套在发酵 罐外，液位计设在发酵罐上。

2.如权利要求1所述的液体深层发酵制备木霉分生孢子的装置，其特征在于发酵罐内壁 的表面粗糙度为Ra0.42～0.01μm，发酵罐的径高比为1∶3～4。

3.如权利要求1所述的液体深层发酵制备木霉分生孢子的装置，其特征在于所述出料管 的出料口朝上。

4.如权利要求1所述的液体深层发酵制备木霉分生孢子的装置，其特征在于所述液体喷 射器沿水平方向均匀安装在液体分布室靠近底部的外侧；所述喷头向下倾斜，喷头与水平方 向成45°～60°角，喷头与发酵罐的内壁成45°～60°的入射角，喷头与发酵罐的内壁相距1.5～ 10cm。

5.如权利要求1所述的液体深层发酵制备木霉分生孢子的装置，其特征在于所述清壁器 通过螺丝固定在法兰轴承上；所述液体分布室为圆桶形液体分布室。

6.一种液态深层发酵制备木霉分生孢子的方法，采用如权利要求1～5任意一种所述液 体深层发酵制备木霉分生孢子的装置，其特征在于包括以下步骤：

1)制备种子的步骤，所述制备种子采用试管斜面接种培养、三角瓶种子培养或种子罐种 子培养的方法制备种子；

2)发酵罐生产木霉分生孢子的步骤：采用发酵培养基，发酵培养基装料为发酵罐容量的 70％，灭菌冷却后，用步骤1)制备的种子接种，在发酵罐中发酵5～7天，得木霉分生孢子； 所述发酵培养基按质量百分比的组成为脱皮后的马铃薯8％～16％，葡萄糖0.7％～2％，余为 水。

7.如权利要求6所述的一种液态深层发酵制备木霉分生孢子的方法，其特征在于所述试 管斜面接种培养采用PDA培养基，灭菌接种后，28℃培养7～8天，斜面上长满绿色的木霉 分生孢子。

8.如权利要求6所述的一种液态深层发酵制备木霉分生孢子的方法，其特征在于所述三 角瓶种子培养采用发酵培养基，将配好的发酵培养基搅匀，分装入250ml的三角瓶中，每瓶 装100ml，灭菌后，用无菌水洗下试管斜面孢子接种，培养温度为28～30℃，摇床转速120rpm， 每隔8～12h，用人工方法将附在三角瓶瓶壁上的菌丝摇下，培养48～72h后，即生长成丰满 绿色的木霉分生孢子。

9.如权利要求6所述的一种液态深层发酵制备木霉分生孢子的方法，其特征在于所述种 子罐种子培养，采用发酵培养基，发酵培养基装料为种子罐容量的70％，灭菌冷却后，用三 角瓶种子培养的种子接种，接种量为10％～15％，培养条件为28～30℃，搅拌速度为90～ 120rpm，通气量(V/V)0～12h时，为1∶0.6～0.8，12h后，为1∶1，培养时间为32～37h， 菌丝体生长达到对数生长期，即得发酵罐用的种子；所述发酵培养基按质量百分比的组成为 脱皮后的马铃薯8％～16％，葡萄糖0.7％～2％，余为水。

10.如权利要求6或9所述的一种液态深层发酵制备木霉分生孢子的方法，其特征在于 所述发酵培养基的配制方法包括以下步骤：

1)马铃薯用清洗脱皮机清洗脱皮后，用打浆机打浆，60～120目过滤去渣，滤液一边搅 拌一边蒸气加热，至淀粉呈分散于水中的溶胶态悬浮物，所述加热的温度为80～90℃；

2)按比例加入葡萄糖，以消泡剂消泡，加水冲稀到100％，调培养基的pH为6～10，得 发酵培养基。