[发明专利]一种利用动物肝脏微粒体酶生物合成7-脱氢胆固醇的方法

权利要求书

1.一种利用动物肝脏微粒体酶生物合成7-脱氢胆固醇的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

1.1微粒体酶液的制备

将50g切成块状的新鲜猪肝脏放入pH 5、0.01mol/L的谷胱甘肽磷酸缓冲溶液中，在4℃条件下用组织匀浆机匀浆，两层纱布过滤，滤液置于超声波细胞破碎仪中，处理条件为：功率400W、温度4℃、时间5min，随后于4℃，12000r·min^-1，离心分离10min，取上清液，得到所述微粒体酶液，

1.2酶促转化反应

将得到的20ml所述微粒体酶液添加20ml 1μg/ml角鲨烯、2ml 2mmol/L还原型辅酶II、1ml 5mmol/L三磷酸腺苷、2ml 20mmol/L烟酰胺，反应5h，得到一种酶促转化反应液，

1.3皂化反应

将所述酶促转化反应液加入5ml 15％KOH-乙醇溶液，30℃振荡反应2h，得到一种皂化反应液，

1.4萃取

将所述皂化反应液用有机溶剂石油醚萃取，萃取剂与反应液体积比为4∶1，萃取温度30℃，萃取时间1h，萃取结束后，有机相在40℃氮气或减压条件下浓缩，得到7-脱氢胆固醇。

2.一种利用动物肝脏微粒体酶生物合成7-脱氢胆固醇的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

1.1微粒体酶液的制备

将50g切成块状的新鲜猪肝脏放入pH 6.5、0.05mol/L的谷胱甘肽磷酸缓冲溶液中，在4℃条件下用组织匀浆机匀浆，两层纱布过滤，滤液置于超声波细胞破碎仪中，处理条件为：功率150W、温度35℃、时间40min，随后于4℃，12000r·min^-1，离心分离10min，取上清液，得到所述微粒体酶液，

1.2酶促转化反应

将得到的20ml所述微粒体酶液添加20ml 40μg/ml角鲨烯、2ml 1mmol/L还原型辅酶II、1ml 2.5mmol/L三磷酸腺苷、2ml 30mmol/L烟酰胺，反应5h，得到一种酶促转化反应液，

1.3皂化反应

将所述酶促转化反应液加入5ml 15％KOH-乙醇溶液，70℃振荡反应1h，得到一种皂化反应液，

1.4萃取

将所述皂化反应液用有机溶剂石油醚萃取，萃取剂与反应液体积比为6∶1，萃取温度60℃，萃取时间4h，萃取结束后，有机相在40℃氮气或减压条件下浓缩，得到7-脱氢胆固醇。

3.一种利用动物肝脏微粒体酶生物合成7-脱氢胆固醇的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

1.1微粒体酶液的制备

将50g切成块状的新鲜羊肝脏放入pH 9、0.05mol/L的谷胱甘肽磷酸缓冲溶液中，在4℃条件下用组织匀浆机匀浆，两层纱布过滤，滤液置于超声波细胞破碎仪中，处理条件为：功率300W、温度4℃、时间20min，随后于4℃，12000r·min^-1，离心分离10min，取上清液，得到所述微粒体酶液，

1.2酶促转化反应

将得到的20ml所述微粒体酶液添加20ml 40μg/ml角鲨烯、2ml 2mmol/L还原型辅酶II、1ml 5mmol/L三磷酸腺苷、2ml 40mmol/L烟酰胺，1ml 1mmol/L MgCL₂，反应5h，得到一种酶促转化反应液，

1.3皂化反应

将所述酶促转化反应液加入5ml 15％KOH-乙醇溶液，60℃振荡反应2h，得到一种皂化反应液，

1.4萃取

将所述皂化反应液用有机溶剂石油醚萃取，萃取剂与反应液体积比为8∶1，萃取温度40℃，萃取时间4h，萃取结束后，有机相在40℃氮气或减压条件下浓缩，得到7-脱氢胆固醇。