[发明专利]一种分离猪X精子和Y精子的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种分离猪X精子和Y精子的方法。

背景技术

在养殖业生产中，有选择地繁殖出大量预知性别的畜禽后代，可大大地提高生产速度和生产的效率。使用X或Y精子给母畜授精，可以生产出许多“预知性别”的后代，按照我们的需要显著地改变后代的性别比例，带来明显的经济和社会效益。例如，在养猪生产中，一般瘦肉型猪的繁殖率低、瘦肉率高，而本地品种猪(如太湖猪、陆川猪)的繁殖率高、瘦肉率低，如在生产中使用瘦肉型猪的公猪配本地母猪，既可提高产仔数又可提高后代的瘦肉率，对提高养殖户的经济效益和人民的生活水平都有好处；另外，在育种工作中，我们需要大量的父系公猪和母系母猪，以便尽快培育出好的品种，并且扩大种猪群的数量。在自然繁殖状态下，公母的比例近于50％，显然无法达到目的，如果使用X、Y精子分离技术，使后代90％为我们所用，则可显著提高生产的经济效益，提高育种工作的速度和效率。

猪X、Y精子分离技术是控制性别的有效方法。如果能够预先将X、Y精子分离开，经过人工授精或体外受精技术，根据哺乳动物性别决定的染色体理论(即XX为雌性、XY为雄性)，就能够得到某种性别远高于50％比例的后代。自从1925年Lush首次报道分离兔子的精子以来，科学家们在精子分离方面做过许多工作，包括根据精子的密度、活力、大小、电荷、表面抗原等特性来试图把精子分开，报道结果很多，但总的看来效率低下，而且可靠性差、重复性低，不足以指导生产。至今为止，通过流式细胞仪进行精子分离已经成为人们公认的最科学、可靠和高效的精子分离方法。流式细胞仪分离精子是一种根据哺乳动物X精子的DNA含量比Y高的原理，通过荧光染色，然后使用流式细胞仪等设备而将精液中X、Y精子分开的方法，如果结合有效的授精措施，可以可靠地控制后代的性别。

目前，流式细胞仪分离猪精子技术还存在精子分离效率较低、分离纯度不够高、成本较高等问题，而且因为猪精子的结构问题和分离条件问题，猪精子经过流式细胞仪分离后活力和使用效果会受到影响，到目前为止，国内未见成熟的猪精子分离方法报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种适用于猪精子的精子分离方法，在保证分离精子纯度的同时，提高分离的效率、分离后精子的活力和使用效果，为商业化生产做准备。

本发明以如下技术方案解决上述技术问题：

(1)将采集的公猪精液缓慢降温到30℃±2℃暂时保存，并尽快进行稀释和分离处理。

(2)用不含卵黄、30℃平衡过的精液稀释液按适当的比例稀释原精液至精子密度为8～15×10⁷/ml，然后加入适当浓度的荧光染色剂，在适当温度的水浴锅中闭光孵化染色；荧光染色结束后，加入适量食物色素，在20℃～25℃下染色2min～5min后过滤；

其中精液稀释液的成分和含量为：