[发明专利]一种利用电荷识别效应测定多巴胺的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种利用电荷识别效应测定多巴胺的方法，可用于人体血清样品 中多巴胺的测定。

背景技术

多巴胺(3，4-二羟基-β-苯乙胺，DA)是一种非常重要的神经递质，且与帕金 森病、亨丁顿舞蹈症和多动症等病症息息相关。目前，测量DA浓度的方法有很 多，电化学方法因灵敏度高、选择性好而广泛应用，尤其是电化学型生物传感 器能够进行活体分析，这一优点是其他方法无法比拟的。金刚石电极、玻碳电 极、铂电极和金电极等裸电极都可以用来测DA，但抗坏血酸(AA)和尿酸(UA)因 为氧化还原电位与DA相近，从而干扰最终测定结果。为了解决这个问题，人们 做出了很多努力，例如：离子交换膜、离子液体-凝胶膜、聚合膜和自组装膜等。 离子交换膜中最典型的膜就是Nafion膜，但Nafion膜有常见的几个缺点：膜 厚度不均一、重现性差、响应时间长、价格昂贵，而自组装能够克服Nafion 膜的这些缺点。二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)是一个由五个羧基(pKa(电离平衡 常数)1.9，2.9，4.4，8.7，10.5)修饰二乙三胺的无机螯合物。目前还没有 文献报道利用DTPA螯合物的静电识别来测定DA。

发明内容

本发明的目的在于提供一种灵敏度高、选择性好可以对人血清样品中的多 巴胺进行测定的方法。

构思如下：多巴胺在电极上明显的氧化还原峰，但是与多巴胺一同存在于 血液中的抗坏血酸也有明显的氧化还原峰，且峰电位与多巴胺的峰电位相近。 通过二亚乙基三胺五乙酸的电荷识别作用，多巴胺在电极上有响应，而抗坏血 酸和尿酸则几乎没有响应，从而达到消除干扰的目的。

其基本原理是：在pH为7.4的磷酸缓冲溶液中，二亚乙基三胺五乙酸有五 个羧基(pKa 1.9，2.9，4.4，8.7，10.5)，易带负电荷；多巴胺(pKa＝8.87) 易带正电荷；而AA(pKa＝4.1)易带负电荷。根据电荷识别效应，带负电荷的二 亚乙基三胺五乙酸吸引正电荷的多巴胺而排斥带负电荷抗坏血酸，从而消除了 抗坏血酸的干扰。

具体步骤如下：

一、金电极的处理：

将金电极用氧化铝粉抛光，依次在硝酸(体积比为1∶1)、无水乙醇和纯水 泡洗，取出后超声洗涤5min，即得到干净的裸金电极。

二、修饰电极的制备：

首先将金电极放入10-15mL含0.01mol/L半胱氨酸的0.1mol/L的HCl 溶液中6h，即制得半胱氨酸修饰电极。然后电极再次在10-15mL含有0.02mol/L 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐和0.04mol/L N-羟基琥珀酰亚 胺的0.05mol/L二亚乙基三胺五乙酸的混合溶液中浸泡5h，即制得二亚乙基三 胺五乙酸/半胱氨酸/金修饰电极。

三、干扰实验：

相对于5×10^-6mol/L的多巴胺、5×10^-5mol/L的抗坏血酸和5×10^-5mol/L尿 酸分别使多巴胺的峰电流增大了0.2％和1.2％，表明5×10^-5mol/L的抗坏血酸 和5×10^-5mol/L尿酸对5×10^-6mol/L的多巴胺无明显干扰，充分表明三胺五乙 酸/半胱氨酸膜有良好的选择性。

四、标准工作曲线的绘制：

取20mL小烧杯，加入含0.1mol/L KCl的0.2mol/L磷酸缓冲溶液10mL， 逐次加入25μL 5.0×10^-5、5.0×10^-6mol/L多巴胺溶液，根据多巴胺浓度c 与峰电流i写出线性方程为i(μA)＝-3.8575c-0.8750×10^-2，相关系数R为 0.9971。

五、人体血清样品中多巴胺含量的测定：

将0.5mL除掉人血清白蛋白(HAS)后的血样加入到4.5mL 0.2mol/L的磷酸 缓冲溶液中，用标准加入法测人血清样品中多巴胺的浓度，并测量加标回收率。

本发明能够用来测量血清中多巴胺的浓度，且制作简单，使用方便。

附图说明