[发明专利]一种滇桂艾纳香水溶性多糖的制备方法

权利要求书

1.一种滇桂艾纳香水溶性多糖的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)提取：将滇桂艾纳香干药材每次加入15倍重量的去离子水或蒸馏 水煎煮，共2次，每次3小时，过滤，合并滤液；

(2)膜分离：将提取的滤液用中空管状陶瓷微滤膜及中空管状有机超滤 膜进行微滤和超滤分离，得到分子量范围在10³至10⁴之间的分离液，将该分 离液用旋转蒸发仪60℃减压浓缩至0.1g/mL；

(3)脱蛋白：在冰浴及搅拌条件下，加入重量浓度为20％的三氯乙酸水溶 液，使多糖溶液体系中三氯乙酸的重量浓度达到5％，静置过夜后离心去除植 物蛋白沉淀；

(4)除盐：离心后的上清液用1mol/L的NaOH溶液中和至pH等于7；减 压浓缩至(0.2～0.5)g/mL，冷却至室温后加无水乙醇至溶液中乙醇的浓度 为75～80％，在5℃冰箱中静置使盐沉淀，离心分离除去沉淀的三氯乙酸钠盐； 将上清液减压蒸干除去乙醇后，用100mL去离子水或蒸馏水溶解；

(5)脱色：将上述脱盐及去除乙醇后的多糖溶液，以DEAE阴离子交换柱 色谱脱色分离，用去离子水洗脱多糖，收集含糖溶液，减压浓缩至糖含量0.5 g/mL，经冷冻干燥得初步纯化的棕黄色絮状粗多糖；

(6)精制：将(5)的粗多糖溶于10mL去离子水中，用0.45μm微孔过滤 膜减压过滤后，过Sephadex G-10凝胶色谱分离去除残余的盐份和其他小分子 杂质，再利用Sephadex G-50凝胶色谱进行纯化，以超纯水为流动相，经自动 部分接收器定量接收，紫外光谱检测，合并单峰部分溶液，将该溶液减压浓缩 至糖含量0.5～1.0g/mL，经冷冻干燥，获得得精制的滇桂艾纳香水溶性多糖。

2.一种滇桂艾纳香水溶性多糖的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)提取：将滇桂艾纳香干药材每次加入10倍重量的去离子水或蒸馏 水煎煮，共3次，每次2小时，过滤，合并滤液；

(2)膜分离：将提取的滤液用中空管状陶瓷微滤膜及中空管状有机超滤 膜进行微滤和超滤分离，得到分子量范围在10³至10⁴之间的分离液，将该分 离液减压浓缩至0.2g/mL；

(3)脱蛋白：在冰浴条件下，边搅拌边加质量浓度为20％三氯乙酸水溶 液，使三氯乙酸的浓度达到5％，在5℃冰箱中静置过夜后离心去除植物蛋白沉 淀；上清液用1mol/L的NaOH溶液中和至pH等于7，减压浓缩后过滤除去沉 淀的盐分；

(4)硅胶柱色谱分离：将脱蛋白后的多糖浓缩溶液约0.5g/mL，均匀拌 入200目的硅胶减压蒸干后，干法上样过硅胶柱，用甲醇和乙酸乙酯按不同比 例混合的溶液体系梯度洗脱，收集含糖部分洗脱液，减压蒸干除完甲醇和乙酸 乙酯后用约50mL的水溶解并过滤，经冷冻干燥得初步纯化的棕黄色粗多糖；

(5)脱色：将粗多糖溶于5倍重量的去离子水，以DEAE阴离子交换柱色 谱脱色分离，用去离子水洗脱多糖，收集含糖溶液，减压浓缩至约0.1g/mL；

(6)透析：将脱色的多糖浓缩液用截留分子量为10³Da的透析袋流水透 析48h，去离子水透析24h，除去盐及小分子量杂质，减压浓缩透析袋内溶液 至0.5～1.0g/mL；

(7)精制：将多糖浓缩液用0.45μm微孔过滤膜减压过滤后，再利用 Sephadex G-50凝胶色谱进一步纯化，以超纯水为流动相，经自动部分接收器 定量接收，紫外光谱检测，合并单峰部分溶液，减压浓缩后冷冻干燥，获得精 制的滇桂艾纳香水溶性多糖。

3.根据权利要求1或权利要求2所述一种滇桂艾纳香水溶性多糖的制备方 法，其特征在于，所述步骤(2)膜分离：所用陶瓷微滤膜的截留分子量为10⁵Da，有机超滤膜的截留分子量分别为10⁴Da和10³Da。