[发明专利]一种平菇多糖的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种平菇多糖的制备方法，尤其是一种采用发酵法生产平菇多糖的方法。

背景技术

平菇侧耳属一类真菌的总称，是古今中外著名的保健食用菌之一。平菇多糖是从平菇中提取、分离、纯化的一种多糖，能促进蛋白质、核酸的合成，提高机体生物免疫力。

目前平菇多糖主要从子实体中提取，人工栽培平菇周期长，从中提取多糖工艺不容易控制，且成本高、产量低。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种操作简便、设备投入小的平菇多糖的制备方法，使其生产胞外多糖时，在发酵罐内实现连续发酵，延长发酵时间，简化操作流程，提高多糖得率。

为解决上述技术问题，本发明采用下列技术方案：

(1)斜面菌种活化：

将平菇菌种移接至马铃薯汁综合培养基斜面上，24℃恒温培养5-10天；

马铃薯汁综合培养基含有下列重量体积百分比的物质：葡萄糖2.0％，磷酸二氢钾0.1％，硫酸镁0.05％，马铃薯汁20％，琼脂2.0％。

培养天数优选为8天。

(2)摇瓶种子培养：

三角瓶内装种子培养基，灭菌，冷却后接斜面母种，振荡培养，共培养4-6天；

摇瓶种子培养基的配方为：玉米粉3％，淀粉1％，麸皮1％，酵母1％，磷酸二氢钾0.1％，硫酸镁0.05％，维生素B1和维生素B2各0.005％。

摇瓶种子培养的条件为：25℃下，摇床转速150r/min，摇瓶装液量为三角烧瓶总容量的2/5，培养液初始pH值为6.0-7.0。

(3)液体深层发酵：

将摇瓶种子接入装有培养基的发酵罐发酵，接种量1-10％，发酵温度为28-30℃，发酵时进行通气搅拌；

液体深层培养基的配方为：玉米粉3％，淀粉1％，麸皮1％，酵母1％，磷酸二氢钾0.1％，硫酸镁0.05％，维生素B1和维生素B2各0.005％。

液体深层发酵的条件为：pH变化范围在5.5-7.0；培养前期24h，通气量为1∶1，v/v/m，搅拌速度为150r/m；24h至发酵结束，通气量控制在1.2∶1，v/v/m，搅拌速度为180r/m。

(4)连续发酵：

液体深层发酵60-75小时后将发酵液强制循环，通过0.2μm的微孔滤膜，滤过速度控制在1个发酵罐体积/小时，在稳态下连续排放滤液，母液回流至发酵罐重复使用，同时以泵连续输入新鲜液体培养基，保持发酵罐内物料的体积恒定，维持罐内的发酵条件，整个过程维持30小时，结束发酵，收集所有滤液，发酵罐内残余的发酵液离心后收集上清液与上述滤液合并，即得总发酵液；

(5)超滤膜分离并浓缩：

将上述总发酵液通过分子量截留值为4000的超滤膜进行超滤，排除滤液，循环操作，直至浓缩液的体积降至原来的1/8-1/3；

(6)醇沉：

加入3倍体积量的95％乙醇至上述浓缩液，0-4℃静置12-24小时，收集沉淀，洗涤干燥，即得。

与从子实体中提取多糖工艺相比，从深层发酵液中提取平菇多糖具有缩短生产周期，减少生产占地面积，严格控制生产条件，生产过程受自然条件影响少等优点。

在发酵后期，罐内多糖存在反馈抑制现象：当浓度升高到一定程度，生物体多糖的合成与外排将受到抑制；同时，发酵液中已经生成的多糖亦会被生物体消耗。这时，将发酵液在密闭稳态的条件下通过膜分离装置，固体菌丝体被截流在反应器内继续利用，而多糖则随着发酵液被排出，在滤过的同时补充新鲜培养液到反应器内，这样就降低了发酵液中多糖的浓度，打破反应平衡，促进生物体的发育和代谢产物的转化，实现连续发酵，延长发酵时间，同时减少反应后期生物体对多糖的消耗，提高代谢物的产率。连续发酵生产与间歇发酵生产相比的优势通过下述试验体现：

试验例1连续发酵与间歇式发酵多糖产量的比较

1、试验方法

1.1单级发酵工艺

(1)斜面菌种活化：

将平菇菌种移接至马铃薯汁综合培养基斜面上，24℃恒温培养8天。

所选马铃薯综合培养基含有下列重量体积百分比的物质：葡萄糖2.0％，磷酸二氢钾0.1％，硫酸镁0.05％，马铃薯汁20％，琼脂2.0％。

(2)摇瓶种子培养：

50ml三角瓶内装种子培养基20ml，灭菌，冷却后接斜面母种，振荡培养，共培养5天；

种子培养基配方：玉米粉3％，淀粉1％，麸皮1％，酵母1％，磷酸二氢钾0.1％，硫酸镁0.05％，维生素B1和维生素B2各0.005％。