[发明专利]检测靶核酸的方法

权利要求书

1.一种检测靶核酸的方法，其特征在于，包含：

制备靶核酸和用于监测洗涤水平的监测核酸，所述靶核酸包含靶 序列，且所述监测核酸包含不与靶序列或靶序列的互补序列杂交的序 列，

将所述靶核酸和监测核酸提供给包含靶序列的互补序列的核酸探 针和监测核酸探针，以监测洗涤水平，所述监测核酸探针包含监测核 酸所含的序列的互补序列，从而使靶核酸与核酸探针杂交，且使监测 核酸与监测核酸探针杂交；

洗涤在上述步骤中产生的杂种，以去除非特异性杂种，

分别测量来自与靶核酸杂交的核酸探针的信号强度和来自与监测 核酸杂交的监测核酸探针的信号强度，和

检查洗涤步骤是否正常进行；

其中所述监测核酸探针显示出与监测核酸杂交且随后在洗涤的最 佳温度范围和该范围附近的改变的洗涤温度洗涤后信号强度的变化，

预先基于从已经与监测核酸杂交且随后在洗涤的最佳温度范围洗 涤的监测核酸探针得到的信号强度，确定具有上下限的洗涤的最佳信 号强度范围，且

所述检查步骤包含作出下述判断：当从与监测核酸杂交的监测核 酸探针得到的信号强度是在洗涤的最佳信号强度范围内时，洗涤已经 正常进行，和当所述信号强度是在洗涤的最佳信号强度范围外时，洗 涤步骤中存在异常。

2.根据权利要求1的方法，其特征在于，当从与监测核酸杂交的 监测核酸探针得到的信号强度高于洗涤的最佳信号强度范围的上限 时，判断洗涤步骤中存在异常。

3.根据权利要求1的方法，其特征在于，当与监测核酸杂交后没 有洗涤从监测核酸探针得到的信号强度假定为100时，在恒定盐浓度 和恒定pH条件下，在不同的洗涤温度洗涤，监测核酸探针显示出每1 ℃13或更高的信号强度变化速率。

4.根据权利要求3的方法，其特征在于，所述信号强度变化速率 是在恒定盐浓度和恒定pH条件下洗涤时，信号强度比相对于洗涤温度 的函数的近似直线的倾斜度。

5.根据权利要求4的方法，其特征在于，信号强度比相对于洗涤 温度的函数的近似直线是在信号强度比达到50时的洗涤温度±2℃的 范围内的4个点的信号强度形成的直线。

6.根据权利要求1的方法，其特征在于，当与监测核酸杂交后没 有洗涤从监测核酸探针得到的信号强度假定为100时，在恒定盐浓度 和恒定pH条件下，在不同的洗涤温度洗涤，监测核酸探针显示出每1 ℃15或更高的信号强度变化速率。

7.根据权利要求6的方法，其特征在于，所述信号强度变化速率 是在恒定盐浓度和恒定pH条件下洗涤时，信号强度比相对于洗涤温度 的函数的近似直线的倾斜度。

8.根据权利要求7的方法，其特征在于，信号强度比相对于洗涤 温度的函数的近似直线是在信号强度比达到50时的洗涤温度±2℃的 范围内的4个点的信号强度形成的线。

9.根据权利要求1的方法，其特征在于，当与监测核酸杂交后没 有洗涤从监测核酸探针得到的信号强度假定为100时，在恒定盐浓度 和恒定pH条件下，在不同的洗涤温度洗涤，监测核酸探针显示出每1 ℃18或更高的信号强度变化速率。

10.根据权利要求9的方法，其特征在于，所述信号强度变化速 率是在恒定盐浓度和恒定pH条件下洗涤时，信号强度比相对于洗涤温 度的函数的近似直线的倾斜度。

11.根据权利要求10的方法，其特征在于，信号强度比相对于洗 涤温度的函数的近似直线是在信号强度比达到50时的洗涤温度±2℃ 的范围内的4个点形成的直线。

12.根据权利要求1的方法，其特征在于，基于使洗涤后来自非 特异性杂种的信号强度与来自特异性杂种的信号强度彼此不同的温 度，决定洗涤的最佳温度范围。

13.根据权利要求1的方法，其特征在于，所述监测核酸是与靶 核酸相同的核酸，用作监测核酸的序列不同于靶序列。