[发明专利]葡萄试管苗日光温室微型扦插扩繁方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种葡萄种苗的扩繁方法。

背景技术

植物组织培养作为生物技术手段，因具有生长环境条件的可控性及其高倍的繁殖系数而被应用于科研及特定植物的扩繁及大量生产。

将脱毒原种培养成生产用种，传统上需要在室内利用组织培养技术通过继代培养大量扩繁，然后通过驯化将组培苗移至温室内培养成种苗，再应用于生产实际。在室内组织培养过程中，不仅需要扎实的理论基础、熟练的操作技术，还需要大量的人力、物力投入，但往往由于扩繁过程中灭菌不彻底极易造成试管苗污染，严重时会导致全军覆没，而且当组培苗外移驯化时，也会由于组培苗的抗病性弱以及驯化条件的难于掌握，常造成组培苗的大量污染死亡。组培苗外移成活率低而导致生产成本过高是普遍存在的问题，同时也是组培技术不能应用于大量生产和大规模开发的主要因素。长期以来，相关技术人员认为组织培养技术是最快速有效的扩繁技术，之所以存在上述缺点，完全是由于操作方法的不合理造成的，因此一直致力于组织培养技术本身的改进，而很少进行其他方面的尝试和探索以寻求到更加经济有效的扩繁方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种成本低、易于操作、成活率高的葡萄种苗扩繁方法。

本发明提供的方法为葡萄试管苗目光温室微型扦插扩繁方法，该方法是将组织培养方法和日光温室微型扦插相结合的扩繁方法，包括以下步骤：

(1)组织培养，得到葡萄试管苗；

(2)将所述葡萄试管苗移入日光温室进行瓶内驯化，日光温室内温度控制在15～30℃，湿度控制在50％～70％，逐渐增强温室内光照强度，驯化3～7天，期间逐渐打开封口膜；

(3)将已驯化好的葡萄试管苗用镊子取出，把葡萄试管苗单节剪断，得到单节繁殖茎段，速蘸生根液后，扦插到装有蛭石并浸有营养液的扦插盘内，然后放在铺有地热线的畦内并进行灭菌，将温度控制在20～30℃，生长7～10天，得到生根小苗。

步骤(1)可以按照如下操作进行：采集半木质化的葡萄生长新稍为组织培养外植体，将采集的新稍去掉叶柄，冲洗后再剪成2～3个芽的茎段进行消毒，把消毒后的繁殖材料剪切成1～2cm的带芽茎段，转接在初代培养基上进行培养，经多次继代和脱毒处理后进行扩繁或者直接引进脱毒试管苗进行扩繁，得到所述的葡萄试管苗。剪成2～3个芽的茎段进行消毒的方法可以为：在超净工作台上，放入0.1％的升汞溶液中进行消毒3～5min，取出后再用70％酒精涮一下，再用无菌水冲洗3～5次。

较佳地，步骤(2)中日光温室内的湿度为60～80％，所述葡萄试管苗的繁殖系数达到5以上，每株葡萄试管苗达4～5节。

步骤(3)中所述营养液可以为不加糖无琼脂无有机成分B5葡萄糖营养液。

较佳地，步骤(3)中，每畦摆满扦插盘后，支小拱棚并覆盖薄膜，保持小拱棚内的温度在25～28℃，5～7天时逐渐撤除薄膜炼苗。

本发明提供的葡萄试管苗日光温室微型扦插扩繁方法还可以包括下面的步骤：

(4)将扦插盘内的生根小苗移栽至营养钵，放在畦上，浇水，灭菌，在移栽小苗的畦上支小拱棚，保温保湿，小苗达2叶1心时，逐步打开小拱棚进行炼苗，小苗达到3～4片叶时，进行炼苗外移或进行再次扦插扩繁。

本发明提供的葡萄试管苗目光温室微型扦插扩繁方法是昌黎果树研究所生物技术研究室从90年代起，以葡萄为材料，经多年科研、生产扩繁实践总结出来的，是从继代增殖培养瓶中，经练苗剪取试管苗的幼嫩茎段进行微型扦插，免用了生根培养基，于蛭石扦插盘中生根，5～7天生根，之后移栽。成本低，速度快，成活率高，幼苗健壮，是可以实现工厂化快繁的技术方法。有效地解决了外移成活率低、继代、生产成本过高的问题。并将此方法成功应用于其他组培植物。其方法操作简便，工作效率大大高于培养室继代培养扩繁，且不易污染，扩繁系数等于或大于培养室试管扩繁系数；小苗株形紧凑，叶片浓绿，幼苗健壮，各种生长指标均优于试管外移苗，外移成活率几乎可保全苗。也由于将培养室扩繁所用的培养基改用为价格低廉的蛭石，生产成本可降低50％以上。

具体实施方式

下面通过具体实施方式对本发明做进一步描述。

1.日光温室的建造及设备安装

1.1根据扩繁任务的需要，建造或改造一座日光温室，座北朝南，跨度一般为6～8m，脊高2～2.5m。

1.2日光温室覆膜、安装自动防寒被或草苫。

1.3防寒被或草苫上架设可收放的透光率50％左右的遮阳网，网、膜之间的距离最近不得少于50cm。

1.4按畦宽1～1.5m，南北向做畦。