[发明专利]记动物体内钙库的方法及其物的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于加速器质谱(简称AMS)技术领域，具体涉及动物体内钙库标记方法，以及标记所用的示踪剂的制备方法。

背景技术

钙是人体中的重要元素，它对于维持人体各系统的正常功能具有重要作用。钙的缺乏会严重危害人们生活质量。宏观上会引起多种疾病如骨质疏松症(OP)、高血压、冠心病、手足抽搐症等。微观上Ca²⁺还作为重要的细胞信使(第二信使)，广泛参与细胞的各种生理功能。如神经、肌肉应激、神经冲动传递等生理过程中，还参与细胞膜的通透性及细胞兴奋性的控制、细胞代谢、细胞形态的维持、细胞周期的调控以及生殖细胞的成熟和受精等。细胞内自由Ca²⁺的分布与转移是形成Ca²⁺信号的基础，准确测定细胞内钙离子的浓度[Ca²⁺]₁及其变化规律具有非常重要的生物学意义。

迄今已有多种分析技术可用于细胞钙离子的测定。如原子吸收分光光度法、焦锑酸钾沉淀法和电子分光成像技术、电子探针X线微区分析法、膜片钳技术、荧光法，其中荧光法具有实时观测细胞内钙离子浓度动态变化的能力，已成为细胞钙离子研究最常用的技术手段。但这些方法的最大缺陷是无法区分内钙和外钙。

在研究钙离子在细胞内外的流向方面，钙同位素示踪法可以发挥独特作用，该方法不像荧光法那样需要将外钙内流和内钙释放两个过程分开研究。通常采用⁴⁵Ca作为细胞实验的示踪核，方法可为摄取法或释放法。摄取法主要是将正常组织或细胞放在含⁴⁵Ca示踪剂的缓冲液或培养基中，加入药物或毒理刺激，一定时间后检测特定部位的⁴⁵Ca含量。⁴⁵Ca释放法是将组织或细胞培养预培养在含⁴⁵Ca示踪剂的培养液中，培养一段时间，使⁴⁵Ca在组织或细胞中达到一定的比例，然后用药物刺激，测定⁴⁵Ca释放到缓冲体系的量以及组织或细胞中⁴⁵Ca的剩余含量。对⁴⁵Ca的测量一般采用液闪记数法和放射自显影法。但⁴⁵Ca是放射性核素，半衰期短，衰变时发射电子和γ射线，对生物体的细胞有一定损伤效应，也不易被实验工作者接受。

另外，⁴¹Ca是一种长寿命半衰期为1.0×10⁵年的长寿命放射性核素，自然界中⁴¹Ca的含量非常底。为了得到⁴¹Ca，一般通过核反应的方法制备，即利用反应堆照射⁴²Ca、⁴⁴Ca、⁴⁶Ca、⁴⁸Ca得到，所得产品需要长时间冷却才能使用。

发明内容

(一)发明目的

本发明针对现有技术所存在的缺陷，提供一种既能区分内钙和外钙，同时对生物体细胞损伤较小的标记动物体内钙库的方法，以及所用示踪剂钙-41的制备方法。

(二)技术方案

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案。

一种标记动物体内钙库方法，是将放射性示踪剂通过肌肉注射或口服等方式注入动物体内，达到平衡后，再服用补钙制剂，代谢、收集待测样品，测量样品中示踪剂量及总钙重量，计算出补钙制剂的净钙吸收率。关键在于，所用的示踪剂是钙-41，示踪剂的测量采用AMS法。

用钙-41作为示踪迹剂时，其用量为每公斤动物体小于或等于60ng⁴¹Ca。

所述的钙-41的制备方法是，利用反应堆照射⁴⁰Ca丰度大于99％的⁴⁰CaCO₃，通过⁴⁰Ca(n，γ)⁴¹Ca反应制得。

另外，为满足AMS测定需要，对堆照后的CaCO₃进行逐级稀释，制备成一系列⁴¹Ca标准样品。具体步骤如下：

①在经堆照后的标准⁴¹Ca样品中加入精确定量的稳定同位素Ca，首先用HCl将标准物质(⁴¹CaCO₃)和稳定CaCO₃溶解，混合，使之生成CaCl₂溶液。