[发明专利]聚谷氨酸-治疗剂结合物的生产方法

说明书

本申请是申请日为2000年10月12日的中国专利申请00817029.0 “聚谷氨酸-治疗剂结合物的生产方法”的分案申请。

技术领域

本发明涉及一种大规模生产聚谷氨酸治疗剂结合物以进行临床开 发的方法。

背景技术

当给药于患肿瘤的宿主时，作为一种聚谷氨酸结合物的抗肿瘤剂 紫杉醇与该药物的非结合形式相比，表现出效力提高且毒性降低(美 国专利5,977,163；Li等人，Cancer Res.，58：2404，1998)。聚谷 氨酸-紫杉醇结合物表现出水溶性提高，从体内清除较慢，并且增加在 肿瘤内的聚集。希望聚谷氨酸和各种其它治疗剂的结合物能够提供目 前所用配方的临床上有用的替代品。

出于研究的目的，聚谷氨酸-治疗剂结合物可以用上述Li等人公 开的方法来生产。在该方法中，将此结合物制备成一种钠盐，渗析以 除去低分子量的杂质和过量的盐，然后冻干。但是该方法并不适合于 大规模生产大量结合物以进行临床开发和使用。具体地说，利用渗析 来除去杂质太耗时间，并且最终产品的产率较低。此外，尽管许多药 物当制备成盐时具有更好的性能(例如溶解性、储存性和加工性提高)， 但对于本发明的聚谷氨酸-治疗剂结合物来说并不是这样。此结合物的 盐形式是带静电的固体，并非游离的流动粉末。与游离的流动粉末相 比，它们更加难以包装，更容易受到粉尘污染的影响，并且更有可能 用有毒试剂污染操作间。因此，需要一种改进的方法来生产聚谷氨酸- 治疗剂结合物，该方法可以用来以高产率和改进材料加工和包装的方 式生产几克到几百克数量的这种结合物。

发明内容

通过提供一种制备聚谷氨酸-治疗剂结合物的改进方法，本发明满 足了这种需要，该方法能够以85％～98％或约85％～约98％的产率提供几 克到几千克数量的药用级结合物。

在一个具体实施方案中，该方法包括：

(a)提供质子化形式的聚谷氨酸聚合物和一种用于与其结合的治 疗剂；

(b)在一种惰性有机溶剂中将所述试剂共价结合到所述聚谷氨酸 聚合物上，形成一种聚谷氨酸-治疗剂结合物；

(c)通过添加过量体积的水性盐溶液，将所述聚谷氨酸-治疗剂 结合物从溶液中沉淀出来；以及

(d)收集质子化固体形式的所述结合物。

附加的除去残留低分子量杂质的步骤可以在步骤(c)和步骤(d) 之间或在步骤(d)之后进行。

在另一个目前是最优选的具体实施方案中，通过下列方法进行质 子化聚谷氨酸-治疗剂结合物的原位生成，该方法包括：

(a)将聚谷氨酸聚合物的一种盐悬浮在一种惰性有机溶剂中；

(b)通过将一种无水的酸添加到所述悬浮液中使所述聚合物质子 化，形成基于结合物的一种可溶盐；

(c)提供一种治疗剂，并将所述试剂共价结合到所述聚谷氨酸聚 合物上，形成一种聚谷氨酸-治疗剂结合物；

(d)通过添加过量体积的水性盐溶液，将所述聚谷氨酸-治疗剂 结合物从溶液中沉淀出来；以及

(e)收集质子化固体形式的所述结合物。

在另一个具体实施方案中，用于大规模生产聚谷氨酸-2紫杉醇 结合物的方法包括：

(a)提供一种聚-L-谷氨酸钠盐的水溶液；

(b)将所述溶液酸化到pH为约2～4，由此将聚-L-谷氨酸的钠盐 转化为质子化形式并从溶液中沉淀出来；

(c)收集聚-L-谷氨酸沉淀并用水洗涤；

(d)将聚-L-谷氨酸干燥到水含量介于约2～约7重量％，优选介 于7～21重量％，最优选介于约7～约21重量％；

(e)使聚-L-谷氨酸和紫杉醇在标准的偶联条件下接触足够的时 间，以通过在紫杉醇的2-OH基团和聚-L-谷氨酸的羧基之间形成的 酯键将紫杉醇结合到聚谷氨酸聚合物上；

(f)将反应混合物冷却到0℃～10℃或约0℃～10℃，同时将水 性盐溶液缓慢地加入到反应混合物中；

(h)酸化得到的悬浮液；

(i)收集作为一种质子化固体的结合物；以及

(j)从质子化固体中萃取出杂质。

为了大规模生产聚谷氨酸-2′紫杉醇结合物，最优选的是用步骤 (a′)和(b′)代替以上步骤(a)-(d)：