[发明专利]甜菜上胚轴离体培养直接多芽发生再生植株的培养方法

说明书

本发明申请是申请人于2006年11月13日申请的发明创造名称为“一种棉 花上胚轴离体培养直接多芽发生再生植株的培养方法”的分案申请，原申请的 申请日为2006年11月13日，申请号为200610149143.4，发明创造名称为“一 种棉花上胚轴离体培养直接多芽发生再生植株的培养方法”。

发明领域

本发明涉及植物组织培养及生物技术领域。具体的说，本发明涉及一种棉 花上胚轴离体培养直接多芽发生再生植株的培养方法。

背景技术

追溯在棉花上已经报道的离体培养再生植株的方法，主要是采用通过愈伤 组织诱导分化出体细胞胚而再生植株的，这样极易造成高的畸形率和较长的培 养周期，并且只适用于珂字棉或野生棉，对主要栽培的棉花品种无效。尽管基 因修饰的棉花商业化获得了成功，但是棉花的遗传转化和再生与其它作物相比 仍然受到挑战，这些问题主要是依赖基因型的再生、体细胞胚发生的效率和体 细胞的变异。棉花生物技术的重要进展将是能够对生产上应用的品种进行遗传 转化和离体培养直接再生植株。而且，离体培养再生植株的方法是获得转基因 棉花的必要前提。为此，一些美国和印度的研究人员利用茎尖、子叶节、胚轴 等开展了棉花不受基因型限制的直接芽发生再生植株的方法研究。

体细胞胚发生再生植株受基因型限制，适用于珂字棉栽培品种。(Trolinder， N.L.and Chen，X.X..Genotype specificity of the somatic embryogenesis in cotton.Plant Cell Reports，1989，8：133-136.)

以下胚轴、子叶、未成熟合子胚作为外植体，通过诱导愈伤组织分化产生 体细胞胚再生植株。(Rangan et al,Regeneration of cotton，United States Patent，5244802.)

以下胚轴、子叶、未成熟合子胚、叶子、花粉、花瓣、胚珠、根、茎尖及 其这些混和体作为外植体，通过诱导愈伤组织分化产生体细胞胚再生植株。 (Wilkins，T.A.et al.Methods for the regeneration and transfornation of cotton. United States Patent Application，20040009601.)

从茎尖(预先存在的分生组织)直接再生植株，每个只获得一株苗，克服 基因型依赖，降低离体培养造成的遗传变异，简单，快速。茎尖培养基为MS (Murashige & Skoog medium，1962，下同)培养基的盐，另加肌醇100mg/l、 维生素B₁1mg/l、葡萄糖或蔗糖20mg/l，不添加任何激素，但是生根依赖基因型。 (Goukd，J.，Banister，S.，Hasegawa，O.Fahima，M.and Smith，R.H.. Regeneration of Gossypium hirsitum and G.barbadense from shoot apex tissue for transformation.Plant Cell Reports，1991，10：12-16.)